S100A9基因在喉癌中的表達(dá)及其與S100A8相互作用的研究.pdf

1、目的：探討喉癌中S100A9基因表達(dá)及其與S100A8的相互作用。 材料和方法： 一、標(biāo)本： 喉鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本來源于空軍463醫(yī)院耳鼻喉科患者，手術(shù)切取喉癌組織及距癌組織4-15毫米以上的癌旁正常組織。手術(shù)切取喉癌組織及癌旁組織均經(jīng)病理診斷證實(shí)。所有喉癌病例均按1987年UICC喉癌分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷，所有患者術(shù)前均未接受放療和化療。腫瘤組織及癌旁組織切除后放入-70℃冰箱中保存。 二、方法： 1、

2、提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，利用半定量RT-PCR的方法以β-actin為內(nèi)參，癌旁正常組織為對照，分析S100A9基因在喉鱗癌組織中的mRNA表達(dá)水平。 2、石蠟包埋切片，脫蠟，癌旁正常組織為對照，免疫組織化學(xué)分析S100A9蛋白在喉鱗癌組織中分布及表達(dá)情況。 3、Hep2細(xì)胞培養(yǎng)，收集對數(shù)生長期的細(xì)胞，提取DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)獲得S100A9全長

3、基因序列并結(jié)合DNA測序、SNP分析檢測S100A8和S1OOA9基因在喉鱗癌Hep2細(xì)胞系中的結(jié)構(gòu)。 結(jié)果： 1、53例病例中，有9例癌旁正常組織、5例腫瘤組織、4例轉(zhuǎn)移組織中未見S100A9基因的表達(dá)；38例腫瘤與癌旁正常組織均表達(dá)的樣本中，有28例癌組織S100A9基因mRNA表達(dá)高于癌旁正常組織，占74％(t=3.886,P<0.001)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。22例轉(zhuǎn)移組織與癌旁正常組織均表達(dá)的樣本中，有14例轉(zhuǎn)移組織

4、S100A9基因mRNA表達(dá)高于癌旁正常組織，占64％(t=2.957，P<0.01)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、免疫組化結(jié)果顯示在40例人喉癌及癌旁正常組織標(biāo)本中，在正常喉鱗狀上皮及分化程度較高的喉癌細(xì)胞中可見棕色顆粒，主要分布于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，S100A9蛋白表達(dá)陽性，而分化程度較低的喉癌細(xì)胞中未見棕色顆粒，S100A9蛋白表達(dá)陰性。 3、喉癌Hep2細(xì)胞系中S100A8和S100A9各區(qū)域未檢測到序列異常。 結(jié)論