急性肺栓塞大鼠早期生長反應(yīng)基因-1表達(dá)及姜黃素的保護(hù)作用.pdf

1、第一部分 目的：用自體血栓模擬自然發(fā)生的靜脈血栓注入肺動(dòng)脈，制備急性肺栓塞大鼠動(dòng)物模型。 方法：采用改良右心導(dǎo)管法將大鼠自體血栓注入肺動(dòng)脈導(dǎo)致急性肺栓塞的發(fā)生。通過控制注入血栓的數(shù)量、速度，同時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測肺動(dòng)脈壓、體動(dòng)脈壓變化。用肺灌注掃描顯像(emissioncomputedtomography，ECT)和蘇木素一伊紅(hematoxylin—eosin，HE)染色組織光鏡觀察判斷造模成功與否。 結(jié)果：PE組O．

2、5～4h大鼠肺動(dòng)脈壓顯著升高，體動(dòng)脈壓顯著降低，PE組與NC組比較(P

3、護(hù)作用和機(jī)制。 方法：68只雄性成年(Sprague-Dawley，SD)大鼠隨機(jī)分為4組：(1)正常對照組(NC組，n=16)；(2)急性自體血栓肺栓塞組(PE組，n=18)；(3)溶劑對照組(DMSO組，n=16)；(4)姜黃素預(yù)處理組(CUR組，n=18)。NC組只接受手術(shù)，于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)注入等量生理鹽水；PE組大鼠不作預(yù)處理，置室溫24h后，制備急性肺栓塞模型；DMSO組腹腔注射DMSO0．0lm1/kg，置室溫24h后制

4、作急性肺血栓栓塞模型；CUR組予姜黃素50mg／kg，約2～2．5ml腹腔注射，置室溫24h后制作模型。每組各半隨機(jī)分為2小時(shí)和4小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死大鼠。按前述改良右心導(dǎo)管法制備急性肺栓塞模型，肺灌注掃描ECT影像和組織病理觀察判斷造模成功。動(dòng)態(tài)監(jiān)測注栓前、注栓后O．5h、注栓后1h\注栓后2h、注栓后4h肺動(dòng)脈壓和體動(dòng)脈壓變化。分別于2小時(shí)和4小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)取血清，用黃嘌呤氧化酶法測血清超氧化物歧化酶(SOD)，用硫代巴比妥酸法測丙二

5、醛(MDA)，用雙抗體夾心ELISA法測腫瘤壞死因子Q(TNFα)。取肺組織稱重，計(jì)算肺系數(shù)(肺質(zhì)量／體質(zhì)量×100％)，免疫組織化學(xué)法測肺血管平滑肌細(xì)胞Egr-1基因的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測肺組織Egr—l和MAPKlmRNA變化，蘇木素一伊紅(HE)染色觀察姜黃素干預(yù)后肺組織形態(tài)學(xué)改變，透射電鏡觀察肺組織超微結(jié)構(gòu)變化。 結(jié)果：l、造模后0．5-4h各時(shí)間點(diǎn)大鼠肺動(dòng)脈平均壓(Mpap)顯著升高，與注栓前比

6、較顯著升高(P<0．01)，PE組0．5-4h與NC組各時(shí)間點(diǎn)比較亦顯著升高(P<0．01)。CUR組能一定程度降Mpap，CUR4h組Mpap低于PE4h組(P

7、較明顯降低，后期有所升高，但仍低于注栓前(P<0．01)。CUR組和PE組比較，造模后各時(shí)間點(diǎn)Mcap有升高，CUR組O．5～4h各時(shí)間點(diǎn)Mcap高于PE組(P

8、肺水腫程度隨時(shí)間進(jìn)行性加重，PE4h組肺系數(shù)高于2h組(P<0．05)。CUR組能一定程度降肺系數(shù)，CUR4h組和PE4h組比較(P<0．05)。 5、PE2h、4h組SOD含量均低于NC組(P<0．0D。CUR組SOD含量有升高，CUR2h組和PE2h組比較(P<0．05)；CUR4h組和PE4h組比較(P<0．01)。 6、PE2h、4h組MDA含量顯著高于NC組(P<0．01)。CUR組能降低MDA含量，CUR2h

9、組和PE2h組比較(P<0．05)；CUR4h組和PE4h組比較(P<0．01)。 7、造模后血清TNFQ含量顯著升高，PE2h、4h組和NC組比較(P<0．0D。CUR組TNFQ含量降低，CUR2h、4h組和PE2h、4h組比較(P<0．0D。 8、Egr-1蛋白表達(dá)在對照組肺血管平滑肌細(xì)胞為低水平表達(dá)。造模2h其表達(dá)顯著升高，4h后下降。造模2h和4hEgr一1蛋白表達(dá)量和對照組比較有顯著升高(P

10、組對Egr—l蛋白表達(dá)有抑制作用，CUR2h組和PE2h組比較有明顯下降(P

11、(P

12、黃素預(yù)處理組肺組織散在出血灶有減少，肺泡壁和間質(zhì)水腫有減輕。 12、透射電鏡觀察可見№組大鼠肺血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，連接緊密，基底膜完整：Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，線粒體嵴清楚，微絨毛未見減少。PE組可見肺血管內(nèi)皮細(xì)胞連接疏松，基底膜疏松水腫明顯，管腔內(nèi)見大量中性粒細(xì)胞貼壁現(xiàn)象，部分管腔堵塞：II型肺泡上皮細(xì)胞空泡變性，微絨毛和板層小體減少明顯，并可見核邊集現(xiàn)象。CUR組見肺血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫有改善，細(xì)胞間連接較致密：II型肺泡上

13、皮細(xì)胞形態(tài)較完整，微絨毛和板層小體有增多，胞核形態(tài)較正常。 結(jié)論：Egr一1在正常肺組織中僅低水平表達(dá)，急性肺栓塞肺組織2h表達(dá)顯著升高，4h后表達(dá)下降，同時(shí)肺組織水腫程度進(jìn)行性加重，表明其可能是急性自體血栓肺栓塞造成急性肺損傷的重要病理變化環(huán)節(jié)之一。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)姜黃素預(yù)處理對大鼠急性自體血栓肺栓塞模型具有保護(hù)作用，其具體保護(hù)機(jī)制與抑制核轉(zhuǎn)錄因子Egr一1基因的過度表達(dá)，降低炎癥細(xì)胞因子TNFα過度釋放，減輕肺水腫，緩解機(jī)體急性