急性肺栓塞大鼠肺部炎癥反應的機制及白藜蘆醇的干預作用.pdf

1、目的： 1.研究大鼠急性肺栓塞后肺部炎癥反應的機制； 2.研究中藥單體白藜蘆醇對急性肺栓塞大鼠肺部炎癥反應的干預作用。 方法： 96只SD大鼠按完全隨機設計分為正常對照組(N組)，溶劑對照組(D組)，血栓栓塞組(T組)，白藜蘆醇+栓塞組(TR組)，各組分1h、4h、8h3個時間點組，分別為N1、N4、N8組，D1、D4、D8組，T1、T4、T8組，TR1、TR4、TR8組，每組8只。采用大鼠自體血凝栓回輸

2、體內(導管經右頸靜脈插至肺動脈)復制急性肺血栓栓塞模型。所有各組大鼠均接受手術及插管處理。N組于相應時間點大鼠尾靜脈注入等量生理鹽水：D組大鼠尾靜脈注射等量1％二甲基亞砜(DMSO)溶液(DMSO用生理鹽水稀釋成1％的DMSO溶液)；T組大鼠輸入血栓復制急性肺栓塞模型；TR組大鼠在輸入血栓復制急性肺栓塞模型后，立即予尾靜脈注射白藜蘆醇溶液10mg/kg(白藜蘆醇溶于1％的DMSO溶液)。按改良右心導管法制備急性肺栓塞模型。各組大鼠右心房

3、取血(10ml注射器右心房緩慢取血5-8ml)室溫靜置10min后4000rm/min、4℃離心10min分離血漿，用ELISA法檢測大鼠血漿單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的變化；取大鼠左肺中下葉用10％多聚甲醛液固定，石蠟包埋切片，用于大鼠肺組織HE染色、免疫組化法檢測MCP-1、激光共聚焦顯微鏡下采用免疫熒光法檢測磷酸化p38的表達；取大鼠右肺及左下肺裝入DEPC水處理的冷凍管-70℃保存，用于R

4、T-PCR檢測肺組織MCP-1mRNA及westernblot檢測肺組織磷酸化p38的變化。 結果： 1.肺組織HE染色結果顯示：N、D組各時間點組大鼠肺內炎癥細胞數(shù)較少；急性肺栓塞組各時間點組大鼠肺內可見大量炎癥細胞；TR1組大鼠肺組織內炎癥細胞數(shù)較T1組無明顯差異(P＞0.05)，TR4組、TR8組大鼠肺組織內炎癥細胞數(shù)分別較T4組、T8h組為少(P＜0.05)。 2.血漿ELISA檢測MCP-1和TNF-α

5、結果顯示：(1)MCF-1檢測結果：T組、TR組各時間點大鼠血漿MCP-1分別較N、D組各時間點無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。(2)TNF-α檢測結果：T1組大鼠血漿TNF-α較N1、D1組無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，T4、T8組大鼠血漿TNF-α分別較N、D組相應時間點有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，T1、T4、T8組間TNF-α表達量隨時間而增高；TR1組大鼠血漿TNF-α的表達量較T1組無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，TR4、TR8

6、組大鼠血漿TNF-α的表達量分別較T4、T8組為低(P＜0.05)。 3.免疫組化和免疫熒光檢測肺組織石蠟切片顯示：急性肺血栓栓塞組大鼠肺組織MCP-1、磷酸化p38明顯表達。 4.WesternBlot檢測肺組織磷酸化p38顯示：T組各時間點大鼠肺組織中磷酸化p38的量分別較N、D組各時間點為高(P＜0.05)，T組各時間點大鼠肺組織中磷酸化p38的量與時間成正相關；TR1組大鼠肺組織中磷酸化p38的量較T1組無統(tǒng)計學

7、意義(P＞0.05)，TR4、TR8組大鼠肺組織中磷酸化p38的量分別較T4、T8組為低(P＜0.05)。 5.RT-PCR檢測肺組織MCP-1mRNA顯示：T組各時間點大鼠肺組織中MCP-1mRNA的量分別較N、D組各時間點為高(P＜0.05)，T組各時間點大鼠肺組織中MCP-1mRNA的量與時間成正相關；TR1組大鼠肺組織中MCP-1mRNA的量較T1組無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，TR4、TR8組大鼠肺組織中MCP-1mR

8、NA的量分別較T4、T8組為低(P＜0.05)。 結論： 1.急性肺栓塞可引起大鼠肺部炎癥細胞浸潤和炎癥介質釋放； 2.急性肺栓塞大鼠可能通過激活肺組織p38MAPK信號轉導通路上調MCP-1的表達，從而促進炎癥細胞在大鼠肺部聚集并釋放炎性介質而加重肺損傷； 3.中藥單體白藜蘆醇可能通過抑制肺栓塞大鼠肺組織p38MAPK信號轉導通路降低MCP-1的表達，從而抑制急性肺栓塞大鼠肺部炎癥細胞聚集并減少炎性介質