酒精致大鼠胰島素抵抗及白藜蘆醇干預(yù)作用的初步研究.pdf

1、第一部分、慢性酒精攝入致大鼠胰島素抵抗及白藜蘆醇的改善作用
　　目的：以液體飼料為載體，給雄性SD大鼠供給不同劑量的酒精，建立慢性酒精攝入的模型，研究慢性酒精攝入對(duì)胰島素抵抗的影響以及白藜蘆醇干預(yù)后的改善作用。
　　方法：60只雄性SD大鼠隨機(jī)分成以下6組：正常對(duì)照組（Con）、低劑量酒精組（Leth,0.8g/kg·bw）、中劑量酒精組（Meth,1.6g/kg·bw）、高劑量酒精組（Heth,2.4g/kg·bw）、白藜

2、蘆醇對(duì)照組（Con+Res,100mg/kg·bw）和白藜蘆醇干預(yù)組(Heth+Res，Heth:2.4g/kg·bw，Res:100mg/kg·bw)。每天每只大鼠給予含相應(yīng)干預(yù)物的液體飼料約100mL，并且記錄每天的進(jìn)食量。每周稱量大鼠體重，定期觀察大鼠的健康狀況。21周后進(jìn)行胰島素耐量和口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)，于22周后斷頭處死大鼠，同時(shí)每組隨機(jī)選取3只在處死前注射胰島素（0.8U/kg.bw），留取血清及肝臟樣本用于檢測血糖、血胰島

3、素、肝糖原以及肝臟中胰島素信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)分子和SIRT1的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.酒精組大鼠的體重和能量利用率低于正常對(duì)照組，但不具有顯著性差異，白藜蘆醇干預(yù)后有一定的改善作用；
　　2.胰島素耐量實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，Heth組的曲線下面積明顯高于Con組的曲線下面積（P<0.05），白藜蘆醇干預(yù)后，能有效降低該面積（P<0.05）；
　　3.口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，和Con組對(duì)比，Meth和Heth

4、組的曲線下面積均明顯增加（P<0.05，P<0.01），白藜蘆醇干預(yù)后，改善作用明顯（P<0.05）；4.酒精作用使得大鼠空腹血糖升高，且Meth和Heth組的升高較明顯（P<0.05，P<0.01），使得大鼠HOMA-IR水平隨酒精劑量的升高而逐漸升高，且高劑量組有顯著性差異（P<0.05），使得大鼠HOMA-β水平均顯著較低（P<0.01），白藜蘆醇干預(yù)具有明顯的改善作用。
　　5.酒精作用使得大鼠肝臟貯存糖原的能力明顯降低（

5、P<0.01），白藜蘆醇干預(yù)后能有效提高肝臟的糖原貯存能力（P<0.05）。
　　6.酒精作用使得大鼠肝臟中IRS2、PI3K、AKT2和SIRT1的蛋白表達(dá)降低，且Meth和Heth組降低較明顯（P<0.05，P<0.01），白藜蘆醇干預(yù)具有明顯的改善作用。
　　結(jié)論：慢性酒精攝入能導(dǎo)致大鼠胰島素抵抗，白藜蘆醇干預(yù)具有明顯的保護(hù)作用，且其保護(hù)可能與SIRT1被激活有關(guān)。
　　第二部分、酒精致大鼠原代肝細(xì)胞胰島素抵抗及

6、白藜蘆醇改善研究
　　目的：以酒精孵育的大鼠原代肝細(xì)胞為研究對(duì)象，研究酒精對(duì)胰島素抵抗的影響和白藜蘆醇的干預(yù)效果，探討相關(guān)機(jī)制。
　　方法：二步膠原酶灌注法提取大鼠原代肝細(xì)胞，不同濃度酒精（0，10，25，50，100mM）孵育3h和24h，研究酒精代謝酶蛋白表達(dá)的變化情況，從而選擇酒精作用合適的濃度和時(shí)間來建立胰島素抵抗模型，并探討白藜蘆醇的改善作用。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度酒精作用細(xì)胞3h和24h后，乙

7、醛脫氫酶2（ALDH2）的變化均不明顯，乙醇脫氫酶（ADH）和微粒體中細(xì)胞色素P4502E1（CYP2E1）的變化較明顯，且25mM酒精在3h和24h時(shí)對(duì)ADH和CYP2E1的影響均具有顯著性的差異（P<0.05，P<0.01）；
　　2.25mM酒精和0.1μM白藜蘆醇分別作用24h均使得大鼠原代肝細(xì)胞中p-AKT/AKT的比值降低（P<0.01），但是兩者聯(lián)合作用能夠提高p-AKT/AKT的比值；
　　3.25mM酒精作

8、用24h使得ADH和CYP2E1的蛋白表達(dá)增加（P<0.01），白藜蘆醇干預(yù)后具有明顯的改善作用（P<0.05），此外，酒精對(duì)ALDH的蛋白表達(dá)無明顯影響，但是白藜蘆醇干預(yù)后能有效提高ALDH的蛋白表達(dá)（P<0.05）；
　　4.白藜蘆醇能有效激活SIRT1的蛋白表達(dá)，顯著改善酒精引起的SIRT1蛋白表達(dá)降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：白藜蘆醇對(duì)酒精引起的肝細(xì)胞中胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)具有一定的改善作用，且其改善作用可能是通過改善