強(qiáng)直性脊柱炎滑膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液對韌帶成纖維細(xì)胞成骨分化的影響.pdf

1、強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis，AS)是一種常見的慢性炎癥性風(fēng)濕性疾病。中軸骨骼的慢性炎癥和新骨形成是其標(biāo)志性的病理學(xué)特點(diǎn)。近些年，隨著影像學(xué)技術(shù)和治療方面的改進(jìn)與提高，已從根本上改變了該疾病的診斷和治療。但是，在抑制結(jié)構(gòu)損傷方面還缺乏有效地藥物可供選擇。目前，傳統(tǒng)的非甾體類抗炎藥物依然是治療強(qiáng)直性脊柱炎的主要藥物之一。腫瘤壞死因子拮抗劑的應(yīng)用，雖然在改善臨床癥狀和體征方面取得了前所未有的效果，但是，近幾年的

2、臨床隨訪研究并沒有發(fā)現(xiàn)它們能夠阻止新骨形成的進(jìn)展。
　　 起止點(diǎn)和關(guān)節(jié)軟骨損傷處是AS新骨形成的主要部位。病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在這些部位中都存在大量的成纖維細(xì)胞異常增殖。因此，我們推測在AS新骨形成過程中，可能存在著成纖維細(xì)胞向成骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。此外，在AS的滑膜組織中可以檢測到具有促進(jìn)成骨性分化能力的因子表達(dá)，如轉(zhuǎn)化生長因子-β和骨形態(tài)發(fā)生蛋白等。因此，我們進(jìn)一步推測AS滑膜細(xì)胞可能能夠一些促進(jìn)成骨性分化的因子，進(jìn)而促進(jìn)成纖維細(xì)胞向

3、成骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。
　　 目的:
　　 探討強(qiáng)直性脊柱炎髖關(guān)節(jié)韌帶來源的成纖維細(xì)胞的體外成骨能力，以及滑膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液對其成骨分化的影響。
　　 方法:
　　 實(shí)驗(yàn)所需標(biāo)本分別來源于強(qiáng)直性脊柱炎和股骨頭無菌性壞死(Aseptic necrosis ofhead of femur，ANFH)患者的髖關(guān)節(jié)韌帶和滑膜組織。分別進(jìn)行韌帶成纖維細(xì)胞和滑膜細(xì)胞原代培養(yǎng)，同時收集第一代的滑膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液。分別應(yīng)用四種

4、不同的條件培養(yǎng)基對第三代的韌帶成纖維細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，即：OIM：骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基(為含有2×10-8mmol/L地塞米松、0.1mg/ml維生素C、20mmol/Lβ-甘油磷酸鈉和10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基)+含有10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基；OIMBMP-2：骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+含有0.3ug/ml BMP-2的DMED/F12培養(yǎng)基；OIMANFH：骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+ANFH滑膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液；OIMAS：骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基+AS滑

5、膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液。分別于誘導(dǎo)后的0、5、10、15和20天時，采用定量和定性的方法檢測堿性磷酸酶活力的變化。采用ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中骨鈣素的表達(dá)水平。采用Von Kossa染色方法檢測鈣結(jié)節(jié)的形成情況。
　　 結(jié)果:
　　 應(yīng)用四種不同的條件培養(yǎng)基對韌帶成纖維細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)后，堿性磷酸酶的活力和骨鈣素的表達(dá)水平隨著誘導(dǎo)時間的延長逐漸升高，其中堿性磷酸酶在第10天時明顯升高，第15天時達(dá)到高峰，骨鈣素在第15天

6、時明顯升高并達(dá)到高峰。在誘導(dǎo)培養(yǎng)的第20天時在各組細(xì)胞中均可檢測到有鈣結(jié)節(jié)形成。比較四種不同的條件培養(yǎng)基對韌帶來源的成纖維細(xì)胞的體外誘導(dǎo)成骨能力發(fā)現(xiàn)，OIMBMP-2＞＞OIMAs＞＞OIMANFH＞OIM，表現(xiàn)在堿性磷酸酶活力和骨鈣素表達(dá)量的高低，四個處理組之間相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。比較AS韌帶成纖維細(xì)胞和ANFH韌帶成纖維細(xì)胞堿性磷酸酶活力和骨鈣素的表達(dá)水平，前者均高于后者，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。
　

7、　 結(jié)論:
　　 強(qiáng)直性脊柱炎髖關(guān)節(jié)韌帶來源的成纖維細(xì)胞在體外具有向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的能力，并且這種轉(zhuǎn)化能力強(qiáng)于對照組。強(qiáng)直性脊柱炎滑膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液對韌帶成纖維細(xì)胞的成骨分化具有一定的促進(jìn)作用，提示強(qiáng)直性脊柱炎滑膜細(xì)胞能夠分泌促進(jìn)成骨分化的因子。
　　 本課題研究證實(shí)了強(qiáng)直性脊柱炎髖關(guān)節(jié)韌帶來源的成纖維細(xì)胞在體外具有向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的能力，同時發(fā)現(xiàn)AS滑膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液對韌帶成纖維細(xì)胞的成骨分化具有一定的促進(jìn)作用。通過該研