2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、[目的]明確糖濃度對(duì)低氧條件下缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)表達(dá)和轉(zhuǎn)錄活性的影響,探討其中可能的機(jī)制以及中藥麝香保心丸干預(yù)對(duì)此的影響。
  [方法]將體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)分為四組:常氧(21%O2)常糖(5.5mM)組,常氧高糖組(25mM),低氧(1%O2)常糖組和低氧高糖組,在高糖濃度作用48h和低氧作用6h后分別用realtimePCR檢測(cè)HIF-1α和VEGF基因表達(dá),WesternBlot檢測(cè)HIF

2、-1α蛋白表達(dá),免疫共沉淀檢測(cè)HIF-1α泛素化降解程度,HIF-1α的轉(zhuǎn)錄活性和去鐵胺對(duì)其轉(zhuǎn)錄活性的影響采用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè);進(jìn)一步觀察在正常氧濃度和低氧的情況下,不同糖濃度(5.5mM、15mM、20mM、25mM、45mM)對(duì)HIF-1α抑制因子(FIH)基因表達(dá)、蛋白表達(dá)的影響,采用化學(xué)衍生反應(yīng)產(chǎn)生熒光的方法檢測(cè)高糖低氧條件對(duì)FIH酶活性的影響,細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)FIH細(xì)胞內(nèi)的定位。在麝香保心丸干預(yù)研究中,分別采用CCK8、T

3、ranswell和劃痕實(shí)驗(yàn)以及流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度的麝香保心丸對(duì)HUVEC的增殖、遷移以及凋亡的影響,并觀察麝香保心丸干預(yù)對(duì)HIF-1α和FIH表達(dá)的影響。
  [結(jié)果]與正常氧濃度組相比(5.5mM和25mM),低氧條件下HIF-1α蛋白表達(dá)顯著增加,其泛素化降解程度顯著下降,其轉(zhuǎn)錄活性顯著增強(qiáng)(P值均<0.05),然而,無論是在正常氧濃度的情況下還是在低氧條件下,糖濃度的變化對(duì)HIF-1α基因表達(dá)和蛋白表達(dá)均無顯著影響,高糖

4、主要抑制低氧誘導(dǎo)的HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性(P<0.05),運(yùn)用去鐵胺干預(yù)可逆轉(zhuǎn)高糖對(duì)低氧誘導(dǎo)的HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用;與正常氧濃度組比較,低氧條件下FIH基因表達(dá)和蛋白表達(dá)均下降(P<0.05),而在低氧條件下,20mM和25mM糖濃度組FIH基因和蛋白表達(dá)顯著高于5.5mM糖濃度組(P<0.05),25mM糖濃度組FIH酶活性顯著高于5.5mM糖濃度組(P<0.05)。麝香保心丸濃度在0.1μg/ml時(shí)可促進(jìn)HUVEC增殖,0.

5、1μg/ml和1μg/ml時(shí)促進(jìn)HUVEC遷移,1μg/ml時(shí)抑制HUVEC凋亡,5μg/ml及以上濃度時(shí)可抑制HUVEC增殖和遷移,促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。麝香保心丸對(duì)HIF-1α蛋白表達(dá)無顯著影響,而不同濃度的麝香保心丸均可抑制FIH基因和蛋白的表達(dá),以2μg/ml濃度抑制作用最強(qiáng)(P<0.05)。
  [結(jié)論]高糖可抑制低氧誘導(dǎo)的HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性,而這種抑制作用可能與其增加低氧條件下FIH的表達(dá)和促進(jìn)其酶活性有關(guān)。低濃度麝香保心

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