經(jīng)OK-432刺激的樹(shù)突狀細(xì)胞對(duì)自然殺傷細(xì)胞增殖及功能的影響.pdf

1、目的：本研究探討經(jīng)OK-432(溶血性鏈球菌菌體制劑)刺激的樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)對(duì)自體自然殺傷細(xì)胞(natural killer cells，NK)體外擴(kuò)增和功能的影響。
　　方法：以密度梯度離心法獲得健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral bloodmononuclear cell，PBMC)，在含有rhGM-CSF、rhIL-4的培養(yǎng)基中培養(yǎng)6天，將細(xì)胞分為未成熟DC組和OK-432刺激的D

2、C組。48小時(shí)后MTT法檢測(cè)DC增殖功能，F(xiàn)CM檢測(cè)CD80、CD83、CD86的表達(dá)和DC吞噬葡聚糖的能力；用干細(xì)胞培養(yǎng)液(SCGM)在37℃、5％CO2、飽和濕度培養(yǎng)條件下以rhIL-2體外擴(kuò)增NK細(xì)胞8天后，將自體DC按imDC組和OK-DC組分別與NK細(xì)胞以1:1、1:5、1:10、1:20、1:40的比例混合繼續(xù)培養(yǎng)。于0、2、4、6天時(shí)計(jì)算NK細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)，F(xiàn)CM檢測(cè)NK細(xì)胞PFP、GraB、CD107a的表達(dá)情況；LDH釋

3、放法檢測(cè)NK細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷活性。
　　結(jié)果：OK-432(5μg/ml)使DC的增殖率較其它各個(gè)濃度組顯著增高，增殖達(dá)到最佳(30％)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，OK-432濃度超過(guò)5μg/ml和低于5μg/ml時(shí)DC的增殖率均逐漸下降；5μg/ml組能夠顯著增強(qiáng)DC表達(dá)CD80、CD86、CD83，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；5μg/ml組的DC攝取葡聚糖的陽(yáng)性細(xì)胞百分率(87.04±6.09)％明顯高于對(duì)照

4、組的(93.96±7.51)％、1.25μg/ml組的(91.81±4.59)％、20μg/ml組的(92.87±5.57)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。1:5(OK-DC)組、1:20(OK-DC)組于第4天時(shí)NK細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)明顯高于對(duì)照組，并高于同比例未處理組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1:5(OK-DC)組在第6天時(shí)NK細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)達(dá)最大，顯著高于對(duì)照組和其它各實(shí)驗(yàn)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1:5(OK

5、-DC)組較對(duì)照組和其它各組能顯著促進(jìn)NK釋放PFP、Grab、CD107a，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；1:5(OK-DC)組對(duì)HepG2細(xì)胞的殺傷活性(67.12±5.36)%達(dá)到最大，顯著高于對(duì)照組的(50.23±4.02)％、1:5(imDC)組的(63.11±5.46)％和1:20(OK-DC)組的(58.42±4.31)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：OK-432(終濃度5μg/ml能明顯促進(jìn)D