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文檔簡介
1、論文一:血管緊張素Ⅱ?qū)渫粻罴?xì)胞和自然殺傷細(xì)胞交互作用中產(chǎn)生白介素-23的作用及機(jī)制研究
研究背景:
樹突狀細(xì)胞(DC)和自然殺傷(NK)細(xì)胞是機(jī)體兩大類免疫細(xì)胞,與其它免疫細(xì)胞共同構(gòu)成血管相關(guān)淋巴組織。DC-NK通過相互作用能加強(qiáng)雙方的功能,產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子促進(jìn)免疫炎癥反應(yīng)。
白介素-23(IL-23)是近年來發(fā)現(xiàn)的IL-12家族新成員,相關(guān)的文獻(xiàn)研究證明,IL-23參與了動(dòng)脈粥樣硬化的病理
2、生理過程。但是沒有相關(guān)研究證明DC-NK交互作用是否能產(chǎn)生IL-23。AngⅡ是動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素之一,AngⅡ在DC-NK交互作用中的作用亦無相關(guān)研究。
目的:
本研究主要探索DC-NK交互作用中IL-23產(chǎn)生及其可能的分子機(jī)制,并探討了AngⅡ?qū)C-NK交互作用中IL-23產(chǎn)生的影響與可能機(jī)制。
方法:
1)從6~8周齡C57/BL6小鼠的骨髓股骨及脛骨獲得骨髓單個(gè)核細(xì)胞
3、,體外培養(yǎng)誘導(dǎo)分化為DC。
2)培養(yǎng)DC6天后,摘取10~12周C57/BL6小鼠的脾臟,獲得脾臟單個(gè)細(xì)胞,用免疫磁珠分選NK細(xì)胞。按照2:1的DC/NK細(xì)胞比例,將DC與新鮮分離的NK共培養(yǎng)。
3)根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組加入或不加AngⅡ,24小時(shí)后留取細(xì)胞培養(yǎng)上清,用ELISA檢測IL-23產(chǎn)量;用流式細(xì)胞儀檢測DC成熟表型;或用免疫磁珠將DC與NK分離開,用Westernblot檢測extracellularsi
4、gnal-regulatedkinase(ERK1/2),stress-activatedproteinkinase/c-JunN-terminalkinase(JNK)和P38MAPK的磷酸化水平。
4)根據(jù)ERK,JNK,P38MAPK活化的情況,在DC里分別預(yù)先加入PD98059(ERK1/2inhibitor,50μM),SB-203580(p38MAPKinhibitor,10μM)或SP600125(JNK1/
5、2/3inhibitor,10μM),再與NK和/或AngⅡ培養(yǎng)24小時(shí),檢測培養(yǎng)上清中IL-23的含量。
結(jié)果:
1)NK細(xì)胞能促進(jìn)DC分泌IL-23,AngⅡ也能促進(jìn)DC分泌IL-23,但是在DC-NK共培養(yǎng)體系中加入AngⅡ后,IL-23的水平反而有所下降。
2)DC-NK交互作用使DC成熟的表面分子標(biāo)志表達(dá)升高,但AngⅡ?qū)C-NK交互作用中的DC成熟狀態(tài)無顯著影響。
3
6、)AngⅡ通過磷酸化ERK1/2使DC產(chǎn)生IL-23;NK通過ERK、JNK、P38MAPK途徑使DC產(chǎn)生IL-23;但在DC-NK共培養(yǎng)體系中,JNK通路對(duì)IL-23的產(chǎn)生起重要作用。
結(jié)論:
1)DC-NK交互作用可以產(chǎn)生IL-23。
2)AngⅡ能促進(jìn)DC產(chǎn)生IL-23,但卻減少了DC-NK交互作用中IL-23的產(chǎn)量。
3)不同的MAPK通路參與調(diào)節(jié)了DC的IL-23產(chǎn)生。<
7、br> 論文二:MicroRNA-29a對(duì)氧化低密度脂蛋白刺激的人外周血來源樹突狀細(xì)胞分泌趨化因子和細(xì)胞因子的影響
背景:
氧化低密度脂蛋白(oxLDL)在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展中有重要推動(dòng)作用。既往的研究發(fā)現(xiàn)氧化低密度脂蛋白能刺激樹突狀細(xì)胞(DC)啟動(dòng)一系列免疫應(yīng)。MicroRNA是一類非編碼小片段RNA,其功能主要是通過與靶基因的mRNA(messengerRNA)的3'非翻譯區(qū)(3'UTR)特異相互作用
8、負(fù)向調(diào)控mRNA的翻譯,進(jìn)而影響細(xì)胞分化發(fā)育、免疫以及炎癥等生理病理過程。對(duì)于oxLDL刺激樹突狀細(xì)胞所引起的MicroRNA的變化在國內(nèi)外研究較少。
本課題組繼往研究發(fā)現(xiàn),oxLDL刺激的人外周血來源DC高表達(dá)microRNA-29a(miR-29a)。miR-29a是一個(gè)被廣泛研究的miRNA,它的作用多樣而復(fù)雜,參與調(diào)節(jié)許多病理與生理過程。高表達(dá)的miR-29a對(duì)DC功能有怎樣的影響,是否參與oxLDL的致病過程,值
9、得探討。
目的:
利用oxLDL刺激人外周血來源DC,觀察miR-29a對(duì)DC的細(xì)胞因子IL-12以及趨化因子分泌的影響,并對(duì)miR-29a的靶標(biāo)基因進(jìn)行驗(yàn)證。
方法:
體外培養(yǎng)誘導(dǎo)分化人外周血來源的DC,分別用miR-29a的模擬物和抑制劑轉(zhuǎn)染DC,然后加入oxLDL培養(yǎng)DC48小時(shí)后,檢測培養(yǎng)上清趨化因子CCL3和CCL5的表達(dá)。分別用熒光定量PCR和蛋白印跡檢測靶標(biāo)基因HSP
10、A14的表達(dá),并用螢火蟲素酶報(bào)告基因檢測驗(yàn)證HSPA14的3’-UTR與miR-29a直接結(jié)合。HSPA14的RNA干擾驗(yàn)證了miR-29a對(duì)DC細(xì)胞因子及趨化因子分泌的負(fù)性調(diào)控作用。
結(jié)果:
miR-29a能降低oxLDL刺激的DC表達(dá)細(xì)胞因子IL-12和趨化因子CCL3、CCL5。熒光定量PCR以及Western-blot證明miR-29a減少了HSPA14的表達(dá)。螢火蟲素酶報(bào)告基因檢測驗(yàn)證HSPA14是
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