Churg-Strauss綜合征患者外周血嗜酸性粒細胞蛋白酶活化受體-2的表達和激活途徑研究.pdf

1、[目的]：通過檢測血清嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(Eosinophil Cationic Protein,ECP)水平,及嗜酸性粒細胞表面CD25和CD69分子的表達,觀察活動期ChlJrg-Strauss綜合征(Churg-Strauss syndrome,CSS)患者外周血嗜酸性粒細胞(Eosinophils,EOS)是否處于激活狀態(tài).了解活動期Churg-Strauss綜合征患者血嗜酸性粒細胞表面及胞漿內(nèi)蛋白酶活化受體-2(Prote

2、ase-Activated Receptor-2 PAR一2)的表達.探討蛋白酶3(Protease 3,PR3)對ChtJrg-Strauss綜合征患者外周血嗜酸性粒細胞的激活作用和對細胞表面及胞漿內(nèi)PAR-2表達的影響,并與IL-5的激活作用進行比較.用抗PAR-2抗體與Churg-Strauss綜合征患者外周血嗜酸性粒細胞共同孵育,以了解抗PAR-2抗體能否阻斷PR3對嗜酸性粒細胞的激活.同時,我們檢測嗜酸性粒細胞表面HLA-DR

3、和CD80/CD86共刺激分子表達以及在IL-5或PR3刺激下分子表達的變化.將PR3與正常人外周血嗜酸性粒細胞孵育30分鐘、1小時和24小時后,觀察細胞表面和胞漿內(nèi)PAR-2表達的動態(tài)變化,以了解嗜酸性粒細胞表面和胞漿內(nèi)PAR-2表達的規(guī)律.用免疫磁珠法分離并純化活動期 Churg-Strauss 綜合征患者、正常對照和疾病對照外周血嗜酸性粒細胞,ELSIA法檢測ECP,流式細胞儀檢測嗜酸性粒細胞表面及胞漿內(nèi)PAR-2,細胞表面CD2

4、5、CD69、HLA-DR和CD80/CD86共刺激分子的表達.將IL-5或PR3與嗜酸性粒細胞孵育4天,ELSIA法檢測培養(yǎng)上清ECP水平,流式細胞儀檢測嗜酸性粒細胞表面及胞漿內(nèi)PAR-2,細胞表面CD25、CD69、HLA-DR和CD80/CD86共刺激分子表達的變化.用抗PAR-2抗體與ChtJrg-Strauss綜合征患者外周血嗜酸性粒細胞、PR3孵育后,檢測嗜酸性粒細胞表面PAR-2和CD69分子的表達.將正常人外周血嗜酸性粒

5、細胞與PR3孵育30分鐘、1小時和24小時后,流式細胞儀檢測細胞表面和胞漿內(nèi)PAR-2表達的動態(tài)變化. [結(jié)論]： 1.活動期Churg-Strauss綜合征患者血清ECP水平增高,外周血嗜酸性粒細胞表面CD25和CD69分子表達增多. 2.ChurgStrauss綜合征外周血嗜酸性粒細胞表面PAR-2低水平表達,并與正常對照和疾病對照之間無顯著性差別,而胞漿內(nèi)PAR-2表達明顯高于正常對照和疾病對照.

6、3.IL-5或PR3的刺激均使Churg-Strauss綜合征患者、正常對照和疾病對照來源的血嗜酸性粒細胞表面CD25和CD69分子的表達增高和ECP釋放增多.和IL-5類似,PR3也可激活Churg-Strauss綜合征、正常對照和疾病對照的血嗜酸性粒細胞.并且IL-5和PR3之間無顯著性差異. 4.經(jīng)PR3刺激后,Chtirg-Strauss綜合征患者外周血嗜酸性粒細胞可表達更多的細胞表面PAR-2和胞漿內(nèi)PAR-2.

7、 5.用可競爭性結(jié)合嗜酸性粒細胞表面PAR-2的抗PAR-2抗體與嗜酸性粒細胞孵育,發(fā)現(xiàn)抗PAR-2抗體與PR3共同孵育組嗜酸性粒細胞表面PAR-2和CD69分子的表達顯著低于僅用PR3刺激組,與陰性對照無差別,提示抗PAR-2抗體可阻斷PR3對嗜酸性粒細胞的激活. 6.活動期Churg-Strauss綜合征患者、正常對照和疾病對照外周血嗜酸性粒細胞幾乎不表達HLA-DR和CD80分子,低表達CD86分子,并且IL-5或PR3