RNAi沉默子宮內(nèi)膜癌RL95-2細(xì)胞COMT基因的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文RNAi沉默子宮內(nèi)膜癌RL952細(xì)胞COMT基因的實(shí)驗(yàn)研究姓名：李揚(yáng)志申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：謝梅青20090524◇中山失莘RNAi沉默了宮內(nèi)膜癌RL952細(xì)胞coMT箍岡的實(shí)驗(yàn)研究體外。但COMT基因與子宮內(nèi)膜癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系目前尚未確定。我們旨在通過本研究采用RNAi方法阻斷COMT基因表達(dá)，探討COMT酶活性的改變及其對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖的影響。了解COMT基因與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間的

2、關(guān)系。材料與方法：選擇雌激素受體陽性的子宮內(nèi)膜癌RL952細(xì)胞，針對(duì)目的基因COMT設(shè)計(jì)4對(duì)小干擾RNA：siCOMT96，siCOMT268，siCOMT303，siCOMT731，及陰性對(duì)照siRNA，通過脂質(zhì)體將其轉(zhuǎn)染入RL952細(xì)胞中。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括：1檢測(cè)RL952細(xì)胞中COMT基因表達(dá)。2檢測(cè)COMTsiRNA對(duì)RL952細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率。3RealTimePCR、WesternBlot分別檢測(cè)COMT基因沉默后其mRNA和蛋白表

3、達(dá)水平的變化，篩選出沉默效果最好的RNA干擾序列。4液相色譜質(zhì)譜(選擇離子監(jiān)測(cè))法，MTT法分別檢測(cè)COMT基因沉默后RL952細(xì)胞中4OHE2水平和RL952細(xì)胞增殖活性的改變。結(jié)果：1RealTimePCR，Westernblot結(jié)果顯示RL952細(xì)胞中有COMT基因mRNA和蛋白表達(dá)。2熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示脂質(zhì)體能有效地將COMTsiRNA轉(zhuǎn)染入RL952細(xì)胞中。其轉(zhuǎn)染率達(dá)80％以上。3RealTimePCR，Westernbl

4、ot結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)中設(shè)計(jì)的四對(duì)COMTsiRNA均能降低RL952細(xì)胞中COMTmRNA和蛋白表達(dá)。但程度不一，均以COMTsiRNA731的抑制效果最顯著。COMTmRNA相對(duì)表達(dá)量于轉(zhuǎn)染COMTsiRNA731后24h(02490017)，48h(0440064)較脂質(zhì)體對(duì)照組24h(1)，48h(1)顯著降低，24h和48h分別下降766％和571％，差異有顯著性(P005)。COMT蛋白表達(dá)于轉(zhuǎn)染COMTsiRNA一731后48