5，7-二甲氧基白楊素誘導人急性髓性白血病細胞生長抑制和凋亡作用的實驗研究.pdf

1、目的：觀察5,7-二甲氧基白楊素（dMChR）誘導人急性髓性白血病(HL-60)細胞系細胞生長抑制和凋亡作用，并探討其作用機制是否涉及PPARγ活化和PTEN-Akt信號傳導途徑的調(diào)控。 方法：體外培養(yǎng)HL-60細胞，MTT比色法測定dMChR對HL-60細胞增殖的影響；細胞計數(shù)法測定HL-60細胞存活率，繪制生長曲線； AO/EB染色法熒光顯微鏡觀察dMChR誘導HL-60細胞的凋亡形態(tài)學改變； PI染色流式細胞術(shù)(FCM)定

2、量分析dMChR誘導HL-60細胞凋亡程度；Western blot分析dMChR對HL-601細胞PPARγ、 PTEN、p-Akt蛋白表達和活性的影響。 結(jié)果：MTT比色測定顯示：dMChR（6.25μM,12.5μM,25.0μM,50.0μM，100.0μM）孵育48小時，顯著抑制HL-60細胞細胞增殖，呈濃度依賴性。其作用效價強度與化療藥物阿糖胞苷(Ara-C)相當，高于先導化合物白楊素(ChR)。細胞計數(shù)結(jié)果表明：1

3、2.5μM，25.0μM和50.0μM 的dMChR均具有抑制HL-60細胞生長作用，呈濃度依賴性；25μM的dMAhR 可使HL-60細胞群體倍增時間延長,由正常的21.5h延長至31.7h。AO/EB染色熒光顯微鏡觀察dMChR處理后，部分HL-60細胞呈現(xiàn)胞質(zhì)、核呈紅色，核固縮或碎裂的典型凋亡細胞形態(tài)。PI染色FCM分析發(fā)現(xiàn)12.5μM，25.0μM和50.0μM的dMChR作用48h后，HL-60細胞凋亡率分別是6.18±2.4

4、％、16.3±3.5％、50.1±5.6％；dMChR (25.0μM)誘導的凋亡率(16.3±3.5％)高于相同濃度的先導化合物白楊素(chrysin, ChR)誘導的凋亡率(4.23±1.1％)。Western blot分析發(fā)現(xiàn)dMChR(25.0μM)分別孵育0h，4h，8h和24h后，HL-60細胞PPARγ及 PTEN蛋白表達以時間依賴方式上調(diào)，而p-Akt蛋白表達下調(diào)，呈現(xiàn)時間依賴性。PPARγ特異性阻斷劑GW9662能有效