馬來(lái)酸桂哌齊特對(duì)腦缺血大鼠模型神經(jīng)保護(hù)作用研究.pdf

1、背景：腦血管病是常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)危重疾病，其中腦梗死占腦血管病的56.6％～80%，致殘率為第一位，給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。腦缺血梗死后，會(huì)促發(fā)一系列的缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng)，這一病理?yè)p傷過(guò)程涉及一系列蛋白的激活和基因調(diào)控的變化，造成神經(jīng)元的損害往往是不可逆的。目前對(duì)缺血性腦卒中的研究多集中缺血后抑制缺血損傷反應(yīng)，較少涉及內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù)的作用。腺苷(Adenosine)是組織細(xì)胞產(chǎn)生并釋放的ATP內(nèi)源性代謝產(chǎn)物，能通過(guò)特異性受體介導(dǎo)發(fā)揮自穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)

2、作用及神經(jīng)調(diào)質(zhì)作用而保護(hù)缺血后腦組織。但外源性腺苷半衰期太短及大劑量可導(dǎo)致心律失常等嚴(yán)重副作用，限制了它在臨床上的使用。馬來(lái)酸桂哌齊特（cinepazide maleate，CM），通過(guò)阻滯細(xì)胞對(duì)腺苷重吸收及抑制腺苷脫氨酶活性，具有獨(dú)特的內(nèi)源性腺苷增效作用。我們通過(guò)預(yù)先給予CM并建立永久大腦中動(dòng)脈阻塞（permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO）模型，觀察CM預(yù)處理對(duì)腦缺血的保護(hù)作用

3、，探討可能的機(jī)制。本課題分為兩部分：
　　第一部分、腺苷增效劑（馬來(lái)酸桂哌齊特）對(duì)局灶性腦缺血大鼠模型保護(hù)效應(yīng)
　　目的：初步探討腺苷增效劑（CM）對(duì)pMCAO模型大鼠神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：首先通過(guò)給予SD大鼠不同劑量的CM或生理鹽水，然后用線栓法建立pMCAO模型大鼠，觀察其對(duì)大鼠行為學(xué)的影響，為下一步實(shí)驗(yàn)提供經(jīng)濟(jì)、有效可行的使用劑量；將SD大鼠隨機(jī)分為缺血對(duì)照組、馬來(lái)酸桂哌齊特預(yù)處理組，根據(jù)劑量摸索的結(jié)果預(yù)先給

4、予CM預(yù)處理，制作pMCAO模型大鼠后，比較缺血對(duì)照組和馬來(lái)酸桂哌齊特預(yù)處理組缺血損傷后梗死體積并應(yīng)用磁共振波譜技術(shù)測(cè)定兩組缺血損傷后不同時(shí)間（3h、6h和24h）及不同部位（梗死核心區(qū)、梗死周圍區(qū)及其對(duì)側(cè)腦區(qū)相應(yīng)部位）的代謝物：氮-乙酰天門(mén)冬氨酸（NAA）、肌酸（Cr）和膽堿化合物（Cho）的濃度變化；比較不同部位的代謝物相對(duì)濃度（rNAA、rCr和rCho）的差異。
　　結(jié)果：CM預(yù)處理能夠改善pMCAO模型大鼠的神經(jīng)功能并減

5、少梗死體積；MRS顯示，缺血梗死早期梗死核心區(qū)與周圍區(qū)以NAA下降為主，核心區(qū)rNAA隨時(shí)間變化進(jìn)行性下降，CM能減少NAA的降低。
　　結(jié)論：CM具有保護(hù)神經(jīng)元，提高抗缺血缺氧的能力；NAA作為神經(jīng)元的標(biāo)志物，可成為評(píng)判藥物對(duì)腦細(xì)胞保護(hù)或治療效果的一個(gè)敏感性指標(biāo)。
　　第二部分、馬來(lái)酸桂哌齊特對(duì)局灶性腦缺血大鼠模型缺血半暗帶MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響
　　目的：觀察CM預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血半暗帶ERK1/2和p38MA

6、PK磷酸化表達(dá)的影響，探討其對(duì)腦缺血保護(hù)的可能作用機(jī)制。
　　方法：SD大鼠隨機(jī)分為缺血對(duì)照組、CM預(yù)處理組和假手術(shù)組。用線栓法建立pMCAO模型大鼠；應(yīng)用特異性抗體，通過(guò)免疫組化和western印跡法檢測(cè)三組大鼠急性腦缺血后半暗帶區(qū)不同時(shí)間點(diǎn)ERK和P38磷酸化表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：CM預(yù)處理能上調(diào)缺血半暗帶區(qū)ERK磷酸化的表達(dá)，抑制p38磷酸化的表達(dá)。
　　結(jié)論：可能激活MAPK信號(hào)通路是馬來(lái)酸桂哌齊特保護(hù)缺血性