構(gòu)骨葉抗真菌及體外對小鼠T細(xì)胞活化增殖作用的研究.pdf

1、　　目的：
　　對產(chǎn)于我國廣東連南、連山等瑤胞聚居區(qū)的冬青科(Ilex latifolia)的變種植物—枸骨葉(Ilex latifolia Thunb)五種化學(xué)提取成分(樣品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ、Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ)進行抗真菌和調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞活化增殖的功能研究。
　　方法：
　　(1) 建立MTT比色法測定抗真菌最低抑菌濃度(MIC)。應(yīng)用NCCLS推薦真菌藥敏實驗方法測定兩性霉素B和伊曲康唑?qū)?種常見真菌(白色念珠菌、光滑念

2、珠菌、季也蒙念珠菌、申克孢子絲菌和石膏樣小孢子癬菌)的最低抑菌濃度(MIC),終點判定分別采用NCCLS推薦的肉眼法和MTT比色法,對兩法進行比較；
　　(2) 應(yīng)用NCCLS推薦真菌藥敏實驗方法測定枸骨葉五種不同的溶媒提取產(chǎn)物(樣品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ、Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ)對5種常見真菌(白色念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、申克孢子絲菌和石膏樣小孢予癬菌)的抗真菌效果,終點判定采用MTT比色法；
　　(3) 用透射電鏡觀察與樣品Ⅰ

3、_Ⅰ共同孵育過的白色念珠菌的超微結(jié)構(gòu),探討枸骨葉抑制真菌的作用機制；
　　(4) 采用MTT法測定枸骨葉五種不同的溶媒提取產(chǎn)物(樣品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ、Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ)對ConA體外刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用的影響；
　　(5) 雙色熒光標(biāo)記法流式細(xì)胞術(shù)測定樣品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ對ConA體外誘導(dǎo)的小鼠T細(xì)胞活化因子CD69表達的影響。
　　結(jié)果：
　　(1) MTT比色法應(yīng)用于NCCLS推薦真菌藥敏實驗方法的終點判定,結(jié)果

4、與常規(guī)肉眼觀察法一致,MTT法測得的A值隨著藥物濃度的增長而降低。
　　(2) 樣品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ?qū)Π咨钪榫凸饣钪榫木泻芎玫囊种菩Ч?與DMSO溶劑對照相比,有效最小濃度分別是31.25μg/ml、7.81μg/ml、31.25μg/ml和7.81μg/ml、31.25μg/ml、7.81μg/ml；樣品Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ?qū)Π咨钪榫凸饣钪榫鷽]有抑制作用。樣品Ⅰ、Ⅰ_Ⅰ、Ⅰ_Ⅱ、Ⅰ_Ⅲ、Ⅱ?qū)疽裁赡钪榫?、申克孢子絲菌和石

5、膏樣小孢子癬菌均沒有抑制作用。拘骨葉抗真菌及體外對小鼠T淋巴細(xì)胞活化增殖作用的研究
　　(3)電鏡下觀察,與構(gòu)骨葉樣品11共孵育(200卜g/tnl,35oC,24h)后的白色念珠菌細(xì)胞壁局部增厚溶解,與細(xì)胞膜分離,胞漿內(nèi)結(jié)構(gòu)受損,出現(xiàn)高電子的凝集塊和電子薄區(qū),基質(zhì)溶解,空泡化,線粒體腫脹,壞死。
　　(4)樣品I(25林g/ml組、50林g/ml組、1 00林g/ml組)、樣品I,(1 2.5林g/ml組、25林g/ml組

6、、50林留ml組、1 00林g/ml組)和樣品I,；(50林g/ml組、1 00林g/ml組、)均可抑制ConA體外刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖(P<；0.01),呈劑量依賴關(guān)系。樣品11,,(6.25林留ml組、12.5林留ml組、25林g/ml組、50林歲ml組、100林歲ml組)和樣品11(6.25林g/ml組、12.5林留ml組、25卜留ml組、50林g/ml組、100林g/ml組)均對ConA體外刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖沒有明

7、顯影響(P>；0.05)。
　　(5)樣品I(25林g/ml組、50林g/ml組、1 00林g/ml組)和樣品I；(1 2.5林g/ml組、25林g/ml組、50林留ml組、1 00林g/ml組)均可抑制Co叭體外誘導(dǎo)的小鼠T細(xì)胞活化因子CD69的表達(P<；0.01),呈劑量依賴關(guān)系。結(jié)論：
　　(1) MTT比色法應(yīng)用于NCCLS推薦真菌藥敏實驗方法的終點判定,是可行且更為客觀準(zhǔn)確的一種方法；
　　(2)構(gòu)