荷載增殖細(xì)胞核抗原肽表位融合白介素18基因的樹突狀細(xì)胞對T細(xì)胞活化作用的研究.pdf

1、目的：研究轉(zhuǎn)染增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)肽表位、白介素18(IL-18)融合基因的樹突狀細(xì)胞(DC)誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的活化作用。
　　 方法：采用密度梯度離心法分離獲取人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，貼壁后加入重組人白介素．4(rhIL-4)，重組人粒細(xì)胞．巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)及脂多糖(LPS)培養(yǎng)6天，獲取DC。將實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、空質(zhì)粒組、PCNA肽表位基因轉(zhuǎn)染組、PCNA肽表位融合IL-18基因轉(zhuǎn)染組4

2、組，將空質(zhì)粒(pIRES-EGFP)，PCNA肽表位質(zhì)粒(pIRES-EGFP-PCNA(6))和PCNA肽表位融合IL-18基因質(zhì)粒(pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18）分別通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染DC。每組按照DC：T淋巴細(xì)胞1：1、1：10、1：20、1：40、1：80的比例分為五個(gè)濃度梯度，與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)。采用CCK-8法檢測T細(xì)胞增殖情況，采用Elisa試劑盒檢測T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-的水平。
　　 結(jié)果：人PBM

3、C可以成功誘導(dǎo)出DC，透射電鏡下可見胞內(nèi)囊泡結(jié)構(gòu)減少，細(xì)胞器比較豐富，細(xì)胞核偏向一側(cè)，表面有細(xì)長毛刺樣突起。四組DC在不同DC：T比例下均能夠刺激T淋巴細(xì)胞增殖，當(dāng)DC：T比例為1：10時(shí)，轉(zhuǎn)染pIRES-EGFP-PCNA(6)/IL-18的DC刺激指數(shù)為2.62，優(yōu)于DC組(1.70)、空載體組(1.78)和pIRES-EGFP-PCNA(6)組(1.93)，P＜0.01。在DC：T的比例為1：10下，轉(zhuǎn)染過pIRES-EGFP-P