姜黃素及其衍生物C086體外抗慢性粒細胞白血病作用及其機制研究.pdf

1、目的:研究姜黃素及其衍生物C086在體外的抗依馬替尼敏感和耐藥慢性粒細胞白血病細胞的作用,探討藥物對白血病細胞的凋亡誘導作用與線粒體凋亡途徑的關系
　　方法:(1)四甲基偶氮唑藍(MTT)法體外檢測C086對白血病細胞K562及耐IM的白血病細胞K562/G01細胞的增殖抑制作用。(2)通過AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測C086及Cur對白血病細胞的凋亡作用。(3)采用JC-1染色法檢測C086及Cur對白血病細胞作用

2、后,對線粒體膜電位的影響。(4)通過PI染色法測定細胞周期改變。(5)對細胞進行CFSE染色后,測定C086及Cur對細胞的分裂增殖的抑制作用。(6)臺盼藍排染法測定C086及Cur對白血病患者CD34+細胞的殺傷作用。(7)集落形成法測定C086及Cur對白血病患者CD34+細胞集落形成能力的抑制作用。(8)通過長期培養(yǎng)體系檢測C086及Cur對白血病患者長期啟動細胞(LTC-IC)的抑制作用。(9)應用蛋白免疫印跡法檢測線粒體凋亡相

3、關蛋白的表達。
　　結果:(1)C086呈劑量依賴性的抑制K562和K562/G01細胞的增殖,24h的IC50分別為3.19μmol·L-1和1.72μmol·L-1。(2)C086及Cur可誘導K562和K562/G01細胞凋亡,且隨著藥物濃度的增加,細胞凋亡率增加。(3)C086及Cur作用白血病細胞后,線粒體膜電位發(fā)生明顯的變化,線粒體膜電位耗散程度增加。(4)C086及Cur可以顯著影響細胞周期進程,阻滯白血病細胞周期于

4、G2/M期。(5)C086可明顯抑制白血病細胞的分裂增殖能力。(6)C086及Cur均表現出對白血病患者的CD34+細胞的抑制作用。(7)C086及Cur對白血病患者CD34+祖/干細胞的集落形成能力有明顯的抑制作用。(8)C086可明顯的抑制CML患者白血病干細胞的自我更新能力,有效抑制LTC-IC。(9)C086及Cur通過線粒體caspase-9/caspase-3途徑誘導白血病細胞凋亡。
　　結論:姜黃素及其衍生物C086