黑素瘤細胞凋亡、外毛根鞘無色素性黑素細胞分離培養(yǎng)以及黑素細胞樹突體系的研究.pdf

1、第一部分:黑素瘤Cloudman S91細胞凋亡的研究.在已知三氧化二砷誘導(dǎo)其他腫瘤細胞凋亡的基礎(chǔ)上,該實驗探討其對惡性黑素瘤的治療作用.在我們的研究中,Cloudman S91黑素瘤細胞系來自患惡性黑素瘤的小鼠.MTT還原法檢測As<,2>O<,3>或順鉑對S91存活率的影響,AO染色觀察凋亡細胞形態(tài)、流式細胞儀分析凋亡周期,末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸(dUTP)末端標記法(TUNEL)原位觀察,計算平均凋亡指數(shù)

2、.DNA凝膠電泳研究基因組DNA.第二部分:毛囊無色素性黑素細胞的分離培養(yǎng).研究發(fā)現(xiàn)無色素性黑素細胞位于毛囊外根鞘的中下部,構(gòu)成皮膚黑素細胞的儲庫.在該研究中,首先,為了明確外毛根鞘細胞成分和無色素性黑素細胞所處位置,我們將拔取的單個的生長期毛囊進行2﹪的瓊脂預(yù)包埋,7μm連續(xù)切片,分別用KKI/beteb和HMB-45單抗染色.另取毛囊用胰酶消化,收集細胞,在電子顯微鏡下進行觀察.結(jié)果顯示:拔取的正常毛囊外根鞘中存在NKI/beteb

3、陽性細胞,而HMB-45染色陰性.在毛母質(zhì)中有大量的HMB-45陽性細胞.消化的細胞為有活性的MC、AMMC、毛皮質(zhì)細胞和成纖維細胞.第二,進行毛囊黑素細胞的分離和培養(yǎng),探討其生物學特性.第三部分人表皮黑素細胞、毛囊無色素黑素細胞和鼠黑素瘤細胞的原子力顯微鏡觀察.在該研究中,我們首次應(yīng)用原子力顯微鏡觀察體外培養(yǎng)中,MC的形態(tài)和黑素體轉(zhuǎn)運方式.結(jié)果顯示:(1)正常人表皮MC胞體為圓形、卵圓形、三角形、四角形,從核周體上伸出8~10個粗的樹

4、突,在靠近胞體處首次分叉,然后逐步分支,向各方位伸展.從樹突的主干上還可見到線狀突起、生長錐、和短而圓鈍的突起,這些突起內(nèi)含有排列這的黑素體.除這些結(jié)構(gòu)外,最特征的是從樹突頂端和胞體伸出的偽絲,其間有排列整齊的黑素體.樹突的頂端形成非分叉的寬約1500-2000納米的突起,內(nèi)含2~3個黑素體,突起上有偽絲伸出.很多突起有一細頸,將含有黑素體的袋狀結(jié)構(gòu)掐斷,脫離黑素細胞.(2)S91鼠黑素瘤細胞只有兩級分支,其間可見大小不一顆粒(黑素體)