早發(fā)重度COPD與HO-1，TNF-α，hBD-1，mEH基因多態(tài)性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種具有氣流受限特征的疾病，這種氣流受限不完全可逆，常呈進行性發(fā)展，與肺部對有害氣體或有毒顆粒的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)。COPD以遍及氣道、肺實質(zhì)和肺血管的慢性炎癥為特征。除炎癥機制外，還存在其它兩條途徑，即肺內(nèi)蛋白酶與抗蛋白酶失衡和氧化與抗氧化失衡，它們在COPD的發(fā)病中也起重要作用。此外，當吸煙或環(huán)境污染時，有毒顆粒和有害氣體的吸入也可導致肺部炎癥。目前多認為COPD是一種多基因遺傳的慢性疾病，是在易感

2、基因基礎(chǔ)上，各種外部因素相互作用的結(jié)果，但其易感基因除α<,1>-抗胰蛋白酶(α<,1>-AT)基因已明確外，其它基因仍尚未定論。早發(fā)重度COPD患者為COPD中的一特殊群體，該群體由于發(fā)病年齡早，病情進展迅速，因而推測具有更強的遺傳易感性，以之為研究對象應(yīng)能更好的排除混雜因素的干擾，更有效的篩查COPD發(fā)病的基因危險因素。因此，本研究通過探討中國漢族人群早發(fā)重度患者HO-1、TNF-α、hBD-1和mEH基因多態(tài)性與COPD相關(guān)性，并

3、與非早發(fā)重度COPD人群和普通人群相對照，尋找中國北方漢族人群早發(fā)重度COPD發(fā)病的易感基因，同時與吸煙等危險因素進行交互作用分析，為COPD高危人群的篩選、早期預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。 材料和方法： 采用病例一對照研究，收集中國漢族45例早發(fā)重度COPD患者、60例非早發(fā)重度COPD患者以及60例健康對照者的外周血，提取基因組DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和瓊脂糖凝膠電泳的方法檢測HO-1基因啟動子區(qū)雙核苷酸(GT)重復(fù)序

4、列在各組人群中的頻率分布；采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFIP)和聚丙烯酰胺凝膠電泳方法，檢測12TNF-a基因啟動子區(qū)-308(G→A)、hBD—1基因外顯子2(exon2 Va138Ile)、mEH基因外顯子3(exon3Tyr113His)、外顯子4(exon4 His139Arg)在各組人群中單核苷酸多態(tài)性(SNP)的頻率，并收集臨床及各種檢驗指標。年齡、肺功能等計數(shù)資料的比較采用t檢驗；各等位基因頻率及各

5、基因型頻率的比較采用X<'2>檢驗；多因素的分析采用多分類無序反應(yīng)變量的Logistic回歸分析；并用相加模型判斷吸煙和各基因多態(tài)性之間的交互作用。 結(jié)果：1．早發(fā)重度組和非早發(fā)重度組在吸煙史和吸煙指數(shù)方面與對照組相比較均有顯著性差異(P<0.05)，但兩疾病組間相互比較沒有差異。2．HO-1基因啟動子區(qū)長GT重復(fù)序列(GT重復(fù)數(shù)目n>30，L位點)等位基因頻率在3組人群中分別為10.00％、27.50％和25.56％；兩兩比較

6、可得：非早發(fā)重度組和早發(fā)重度組L型等位基因頻率均高于對照組(P<0.05)，L等位基因在兩病例組之間沒有顯著差別(P=0.75)；早發(fā)重度組和非早發(fā)重度組內(nèi)吸煙亞組和非吸煙亞組的L等位基因頻率分別為(23.33％VS 30.00％)和(26.19％VS 30.56％)，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗均無顯著性差異(P>0.05)。3．IqNIF-α基因啟動子區(qū)-308A等位基因頻率在3組中分別為8.33％、19.17％和34.44％；非早發(fā)重度組和早發(fā)重

7、度組A等位基因頻率均高于對照組,早發(fā)重度組A等位基因頻率要高于非早發(fā)重度組(P=0.01)；早發(fā)重度組和非早發(fā)重度組內(nèi)吸煙亞組和非吸煙亞組的A等位基因頻率分別為33.33％VS 36.67％和17.86％VS 22.22％，經(jīng)統(tǒng)計學檢驗均無顯著性差異。4．所有研究對象的hBD-1均以同源野生型的方式存在，并沒有發(fā)現(xiàn)雜合型和同源突變型基因型的存在；5．mEH基因exon<'3>的同源野生型、雜合型、同源突變型在健康對照組、非早發(fā)重度COP

8、D組以及早發(fā)重度COPD組中分別為(23.33％、26.67％、26.67％)、(35.00％、38.33％、35.56％)、(41.67％、35.00％、37.77％)，經(jīng)X<'2>檢驗均無顯著性差異(P>0.05)。6．mEH基因exon4的同源野生型和雜合型在健康對照組、非早發(fā)重度COPD組以及早發(fā)重度COPD組中分別為(78.33％、85.00％、82.22％)、(21.67％、15.00％、17.78％)，同源突變型的頻率均為

9、0，經(jīng)X<'2>檢驗均無顯著性差異(P>0.05)。7．mEH酶活性在3組間的分布無顯著性差異(P>0.05)。8．多變量綜合分析結(jié)果表明，吸煙、HO－1SNP和TNF-aSNP均為COPD發(fā)病的危險因素，在早發(fā)重度COPD組和非早發(fā)重度COPD組OR值分別為(4.75、3.64、11.88)、(3.63、4.01、3.30)。9TNF-aSNP與吸煙的交互作用指數(shù)S在早發(fā)重度組和非早發(fā)重度組分別為2.92和51.01，TNF-α基因

10、多態(tài)性與吸煙存在相加模型的正交互作用；HO-1基因啟動子STR與吸煙的交互作用指數(shù)S在早發(fā)重度組和非早發(fā)重度組分別為5.22和4.55，HO-1基因多態(tài)性與吸煙存在相加模型的正交互作用；TNF-α SNP與HO-1基因啟動子STR的交互作用指數(shù)S在早發(fā)重度組和非早發(fā)重度組分別為7.96和7.72，TNF-αSNP與HO-1基因啟動子STR存在相加模型的正交互作用。 結(jié)論1.HO-l啟動子區(qū)基因多態(tài)性和TNF-α-308(G/A)

11、基因多態(tài)性均是早發(fā)重度COPD發(fā)病的危險因素； 2．與非早發(fā)重度COPD病人相比，早發(fā)重度COPD具有更高的A等位基因頻率，TNF-α-308A等位基因與早發(fā)重度COPD更具相關(guān)性； 3．TNF-α-308(G/A)基因多態(tài)性和HO-1啟動子區(qū)基因多態(tài)性均與吸煙存在相加模型的正交互作用，兩者之間也具有交互作用； 4．hBD-1 exon2(Val38Ile)的基因多態(tài)性與早發(fā)重度COPD的易感性無顯著相關(guān)性；