IL-10和TNF-α基因多態(tài)性與子癇前期相關(guān)性研究.pdf

1、【研究背景】
　　妊娠期高血壓疾?。℉ypertensivedisorderscomplicatingpregnancy，HDCP）是妊娠特有疾病，在全球的發(fā)病率是3％-4%，在西方國家，其平均發(fā)病率約為5%-10%，在部分發(fā)展中國家和地區(qū)的發(fā)病率更高，在中國的發(fā)病率9.4%-10.4%，其中2%-7%為子癇前期（Pre-eclampsia，PE），PE主要特點為20周以后出現(xiàn)高血壓及尿蛋白，是導(dǎo)致醫(yī)源性早產(chǎn)和孕產(chǎn)婦死亡的主要原因

2、之一。全世界每年約有800萬妊娠婦女發(fā)生子癇前期，子癇前期患者，發(fā)生胎盤早剝、凝血功能障礙、腦血管意外、呼吸窘迫綜合征以及肝腎功能損傷等風(fēng)險大大增加。在美國，子癇前期占孕產(chǎn)婦死亡的18%，在我國，子癇前期是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦死亡的第二個主要因素。子癇前期對胎兒的生長發(fā)育也構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，約25%的新生兒死亡與子癇前期相關(guān)。目前除終止妊娠，尚無有效緩解癥狀的方式。妊娠期高血壓疾病嚴(yán)重并發(fā)癥與母嬰的預(yù)后有密切的關(guān)系，通過降低妊娠期高血壓疾病嚴(yán)重并發(fā)

3、癥的發(fā)生，這對減少孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒的死亡率，改善妊娠結(jié)局起重要作用。
　　妊娠期高血壓疾病的發(fā)病原因及發(fā)病機制目前尚未完全闡明，經(jīng)過國內(nèi)外學(xué)者們的不斷努力，妊娠期高血壓疾病的病因?qū)W研究從臨床流行病學(xué)研究、建立動物模型、對組織細(xì)胞學(xué)的觀察、直至如今分子生物水平的研究。妊娠期高血壓疾病病因相關(guān)學(xué)說主要有炎癥免疫過度激活、子宮螺旋小動脈重鑄不足、血管內(nèi)皮細(xì)胞受損、遺傳因素、胰島素抵抗及營養(yǎng)缺乏。迄今為止，妊娠期高血壓疾病的病因及發(fā)病機制尚

4、不能用任何單一的理論進行全面詮釋。如何對妊娠期高血壓疾病進行早期預(yù)測及臨床預(yù)警，如何對妊娠期高血壓疾病及其并發(fā)癥進行及時診治，權(quán)衡母嬰雙方利弊，減少孕產(chǎn)婦死亡率，提高圍產(chǎn)兒存活率，一直是產(chǎn)科鄰域研究的重要課題。
　　子癇前期的發(fā)生是遺傳因素和環(huán)境因素綜合作用的結(jié)果，在個體具有遺傳易感性的基礎(chǔ)上，環(huán)境有害因素作用會導(dǎo)致疾病發(fā)生。易感基因的特點是變異的基因本身并不能直接導(dǎo)致疾病的發(fā)生，而只造成機體患病的潛在危險性增加，當(dāng)有外界有害因素

5、介入時，即會致疾。不同的個體和群體對不同疾病的易感性、抵抗性以及其他生物學(xué)效應(yīng)（如對藥物的敏感性）存在差異，人類基因組核苷酸序列的變異是這種差異的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，因此，子癇前期在不同種族的患病率存在差異。
　　單核苷酸多態(tài)性（SNP）是指在基因組上單個核苷酸的變異，包括置換、缺失、顛換和插入。SNP作為一種遺傳標(biāo)記，在基因組中具有高密度和高保守的特點。大多數(shù)SNP位于基因組的非編碼區(qū)，即使位于基因組編碼區(qū)也不影響翻譯后的氨基酸，這些S

6、NP對個體的表現(xiàn)型都不會產(chǎn)生影響，只有少數(shù)SNP位于基因表達調(diào)控區(qū)或者蛋白編碼區(qū)中，能夠?qū)е禄蜣D(zhuǎn)錄活性或蛋白結(jié)構(gòu)功能的改變，因而引起個體對特定環(huán)境或病因的易感性。SNP作為反映個體遺傳易感性差異的重要因素，在某一疾病人群和正常對照人群中進行SNP對比研究，可以確定SNP位點與該疾病的風(fēng)險關(guān)系，因而可用于疾病遺傳易感性的研究。
　　由于不同地域和種族間存在遺傳差異，為了解深圳地區(qū)漢族婦女子癇前期發(fā)病的遺傳基礎(chǔ)，根據(jù)以前的研究，本研

7、究選取7個PE相關(guān)基因的9個SNP位點（FⅤ基因rs6025和rs6020位點，MTHFR基因rs1801133位點，F(xiàn)Ⅱ基因rs1799963位點，SERPINE1基因rs1799889位點，CTLA4基因rs231775位點，IL-10基因rs1800896位點,TNF-α基因rs1800629和rs1799724位點），所有的基因都參與凝固、纖維蛋白溶解和炎癥，探討基因多態(tài)性與子癇前期的關(guān)系。
　　【目的】
　　本研究

8、通過對2011年1月至2014年12月在深圳市分娩的妊娠期高血壓疾病孕產(chǎn)婦進行臨床流行病學(xué)分析，探討妊娠期高血壓疾病的發(fā)病情況及對孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒的影響；同時通過對子癇前期患者的7個子癇前期相關(guān)基因的9個SNP位點（FⅤ基因rs6025和rs6020位點，MTHFR基因rs1801133位點，F(xiàn)Ⅱ基因rs1799963位點，SERPINE1基因rs1799889位點，CTLA4基因rs231775位點，IL-10基因rs1800896位點

9、,TNF-α基因rs1800629和rs1799724位點）分析，探討這些參與凝血、纖維蛋白溶解和炎癥的基因位點與子癇前期易感性的關(guān)系。
　　【材料與方法】
　　1.研究對象
　　對2011年1月至2014年12月在深圳市分娩的妊娠期高血壓疾病孕產(chǎn)婦病例14318例進行回顧性分析，同時選取2014年7月至2015年5月期間，在深圳市婦幼保健院產(chǎn)科住院分娩的的孕婦中，根據(jù)病史、臨床表現(xiàn)及生化檢查的結(jié)果，選取117例子癇前

10、期患者（輕度子癇前期11例、重度子癇前期106例）為子癇前期組，收集同期住院分娩的正常孕婦286例為對照組。子癇前期組年齡范圍為20~42，平均年齡為31.43±5.18；平均孕周為34.18±3.55。對照組年齡范圍為16~40，平均年齡為28.86±3.89；平均孕周為39.26±1.19。
　　2.研究方法
　?。?）對孕婦的發(fā)病情況、基本情況、母兒并發(fā)癥、分娩方式等臨床資料進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　?。?）研究對象入

11、院后，抽取肘靜脈血液2ml，注入EDTA抗凝真空采血管，標(biāo)注病人姓名，住院號，采集日期，保存于-80℃冰箱備用。使用QiagenDNA提取試劑盒提取DNA，采用PCR擴增目的條帶，使用多重SNaPshot基因分型技術(shù)，送中國深圳優(yōu)謹(jǐn)康生物科技有限公司測序，使用軟件查看SNP位點并用統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。
　　3.統(tǒng)計學(xué)方法
　　用Excel軟件及SPSS17.0對數(shù)據(jù)進行處理及分析。計數(shù)資料的各組間比較采用卡方檢驗，以P<

12、0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。正態(tài)分布檢驗方法采用K-S檢驗法（Kolmogorov-SmirnovTest），符合正態(tài)分布的計量資料比較采用方差分析，結(jié)果的表達方式用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，計數(shù)資料以頻數(shù)（百分?jǐn)?shù)）表示。兩樣本均數(shù)的比較采用兩獨立樣本的t檢驗，多組均數(shù)間兩兩比較采用單因素方差分析，經(jīng)過方差齊性檢驗，方差齊性的選用LAD法；方差不齊的選用Welch法。使用擬合優(yōu)度卡方檢驗對基因型分布進行Hardy-Weinberg平衡

13、定律分
　　析，組間基因型和等位基因頻率的比較采用R×C表卡方檢驗，并用非條件logistic回歸來計算相關(guān)值（OR）及95%可信區(qū)間（CI）。以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　【結(jié)果】
　　1.2011年1月至2014年12月，在深圳市分娩的815383例孕產(chǎn)婦中，符合妊娠期高血壓疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)共14318例，妊娠期高血壓疾病總發(fā)生率1.76%。妊娠期高血壓疾病孕婦的發(fā)病孕周有提前趨勢，分

14、娩方式以剖宮產(chǎn)為主，初產(chǎn)婦與經(jīng)產(chǎn)婦構(gòu)成比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，孕婦的年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義，流動人口所占比例呈下降趨勢。妊娠期高血壓疾病各組嚴(yán)重并發(fā)癥按發(fā)生率由高到低依次是：產(chǎn)后出血，胎盤早剝，彌散性血管內(nèi)凝血（DIC），急性心功能衰竭，腎功能衰竭，HELLP綜合征，腦血管意外。妊娠期高血壓疾病圍產(chǎn)兒結(jié)局包括：早產(chǎn)、死胎、新生兒死亡、胎兒窘迫、胎兒生長受限及新生兒窒息。
　　2.在9個SNP位點中3個SNP位點（rs6025，rs179

15、9963，rs1799889）基因型分布不符合哈迪-溫伯格（Hardy-Weinbergequilibrium）遺傳平衡定律，在后續(xù)分析中排除。
　　2.1FⅤ基因rs6020位點多態(tài)性在子癇前期和對照組間的比較
　　子癇前期組孕婦的rs6020對應(yīng)基因型為AA型、GG型、GA型，基因型頻率分別為47.86%、11.11%、41.03%；對照組基因型頻率分別為39.86%、12.59%、47.55%，分布無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0

16、.336）。子癇前期組孕婦rs6020等位基因頻率G為31.62%，A為68.38%，對照組等位基因頻率G為36.36%，A為63.64%，兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.200）。
　　2.2MTHFR基因rs180113位點多態(tài)性在子癇前期和對照組間的比較
　　子癇前期組孕婦的rs180113對應(yīng)基因型為GG型、AA型、GA型，基因型頻率分別為39.32%、15.38%、45.3%；對照組基因型頻率分別為42.66%、1

17、1.54%、45.8%，分布無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.549）。子癇前期組孕婦rs180113等位基因頻率A為38.03%，G為61.97%，對照組等位基因頻率A為34.41%，G為65.59%，兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.333）。
　　2.3CTLA4基因rs231775位點多態(tài)性在子癇前期和對照組間的比較
　　子癇前期組孕婦的rs231775對應(yīng)基因型為CC型、TT型、CT型，基因型頻率分別為41.03%、9.4%、4

18、9.57%；對照組基因型頻率分別為41.61%、11.89%、46.5%，分布無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.729）。子癇前期組孕婦rs231775等位基因頻率T為34.19%，C為65.81%，對照組等位基因頻率T為35.14%，C為64.86%，兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.797）。
　　2.4IL-10基因rs1800896位點多態(tài)性在子癇前期和對照組間的比較
　　子癇前期組孕婦的rs1800896對應(yīng)基因型為GG型、AA

19、型、GA型，基因型頻率分別為1.71%、77.78%、20.51%；對照組基因型頻率分別為2.1%、86.71%、11.19%，分布有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.049）。子癇前期組孕婦rs1800896等位基因頻率G為11.97%，A為88.21%，對照組等位基因頻率G為7.69%，A為92.31%，兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.054）。
　　2.5TNF-α基因SNPs位點多態(tài)性在子癇前期和對照組間的比較
　　子癇前期組孕婦

20、的rs1800629對應(yīng)基因型為AA型、GG型、GA型，基因型頻率分別為0、92.94%、7.76%；對照組基因型頻率分別為1.4%、82.17%、16.43%分布有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.029）。子癇前期組孕婦rs1800629等位基因頻率A為3.88%，G為96.12%，對照組等位基因頻率A為9.62%，G為90.38%，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.006）。
　　子癇前期組孕婦的rs1799724對應(yīng)基因型為TT型、CC型

21、、TC型，基因型頻率分別為2.59%、54.31%、43.10%；對照組基因型頻率分別為1.17%、80.08%、18.75%，分布有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.003）。子癇前期組孕婦rs1799724等位基因頻率T為24.14%，C為75.85%，對照組等位基因頻率T為10.55%，C為89.45%，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.001）。
　　2.6SNP位點基因型分布與子癇前期發(fā)病風(fēng)險相關(guān)性
　　2.6.1IL-10和TN

22、F-α基因3個多態(tài)性位點與子癇前期的單因素分析
　　rs1800896位點3種基因型，GA型基因型在病例組中的分布頻率頻率明顯高于對照組（P=0.015,OR=0.49,95%CI:0.28-0.88），GG型基因型的分布頻率頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.907），G等位基因在病例組中的頻率明顯高于對照組（P=0.026,OR=1.54,95%CI:1.09-1.99）。
　　rs1800629位點3種基因型，AA型基因型在

23、病例組中的分布頻率頻率明顯低于對照組（P=0.029,OR=0,95%CI:0），A等位基因在病例組中的頻率明顯低于對照組（P=0.010,OR=0.40,95%CI:0.21-0.59）。
　　rs1799724位點3種基因型，TT型基因型在病例組中的分布頻率頻率明顯高于對照組（P=0.003,OR=3.62,95%CI:1.15-8.07），T等位基因在病例組中的頻率明顯高于對照組（P=0.001,OR=1.65,95%CI:

24、1.32-1.97）。
　　2.6.2基因型的Logistic回歸分析
　　非條件Logistic回歸分析顯示，rs1799724位點，rs1800896位點的OR值分別為2.15（95%CI:1.16-2.88,P=0.0008），1.87（95%CI:0.22-0.97,P=0.03），表明這兩個SNP的基因型分布與子癇前期風(fēng)險相關(guān)（P<0.05）。當(dāng)聯(lián)合rs1800896、rs179972兩個位點時，OR值達2.62（

25、95%CI:1.38-3.00,P=0.002），將rs1800629納入回歸模型后，OR值達OR=10.6（95%CI:2.07-13.41,P=0.048）。
　　【結(jié)論】
　　1.2011-2014年深圳市妊娠期高血壓疾病的發(fā)生率較低，但重度子癇前期的發(fā)生率較高；妊娠期高血壓疾病病例中流動人口的發(fā)生率較高；妊娠期高血壓疾病的分娩方式以剖宮產(chǎn)為主；
　　2.妊娠期高血壓疾病仍是引起妊娠不良結(jié)局的嚴(yán)重疾病，產(chǎn)后出血、

26、胎盤早剝、早產(chǎn)及胎兒生長受限是妊娠期高血壓疾病主要并發(fā)癥；
　　3.FⅤ基因、rs6020，MTHFR基因rs1801133，CTLA4基因rs231775SNPs可能與我國南方漢族人群子癇前期發(fā)病無明顯相關(guān)；
　　4.本項研究表明IL-10基因rs1800896及TNF-α基因rs1800629、rs1799724單核苷酸多態(tài)性可能與我國南方漢族人群子癇前期發(fā)病有關(guān)，rs1800896G等位基因，rs1799724TT基因