不同濃度的胎牛血清對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞純度及周期的影響.pdf

1、目的:比較含有體積分?jǐn)?shù)為0.10,0.15,0.20的胎牛血清(fetal bovine serum FBS)的完全培養(yǎng)基對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)純度及細(xì)胞周期的影響,尋求適宜干細(xì)胞培養(yǎng)的FBS濃度。
　　方法:用頸椎脫臼法處死SD大鼠,采用全骨髓貼壁分離培養(yǎng)大鼠BMSCs。實(shí)驗(yàn)分為A、B、C三組,FBS體積分?jǐn)?shù)分別是0.10、0.15、0

2、.20的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的BMSCs,比較這三組細(xì)胞在第2、3、4、5代的CD45、CD29、CD90、CD44的表達(dá)情況;收集A組P3細(xì)胞,加成骨誘導(dǎo)液,用茜素紅檢測(cè)鈣結(jié)節(jié)的形成結(jié)果;消化 A組P3細(xì)胞,用3種不同濃度的完全培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)4 d,用流式細(xì)胞儀測(cè)其在培養(yǎng)后的24、48、72、96 h的細(xì)胞周期;收集P3 BMSCs制備細(xì)胞懸液接種到6塊96孔板,每塊板接種的BMSCs分別用FBS體積分?jǐn)?shù)是0.10、0.15、0.20的完全

3、培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),每天取1塊板用CCK-8檢測(cè)其吸光度(OD)。
　　結(jié)果:CD45分子陰性,CD29、CD90、CD44分子陽(yáng)性,3種完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的BMSCs的表面標(biāo)志物在前2代時(shí)差別較大,但在P3、P4時(shí)差別已較少,P4時(shí),均可以獲得較純的BMSCs;A組 P3細(xì)胞經(jīng)過(guò)成骨誘導(dǎo)后發(fā)現(xiàn)有鈣結(jié)節(jié)的產(chǎn)生;細(xì)胞周期結(jié)果顯示,在同一時(shí)間點(diǎn),G0/G1期:A、B、C三組隨著胎牛濃度的增加,G0/G1期降低且無(wú)差異;G2/M期:在培養(yǎng)后的2

4、4 h,A、B、C三組有差異(P<0.05,F=12.412),但隨著時(shí)間的延長(zhǎng),差異消失;S期,三組均無(wú)差別;S+G2/M期隨胎牛濃度的增加而增高。細(xì)胞活力結(jié)果顯示,在24 h時(shí)A、B、C三組的OD值依次增大,有差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,F=5.002),隨時(shí)間的延長(zhǎng)三組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:這3種培養(yǎng)基在第4代均能獲得較純的BMSCs;細(xì)胞周期及活力結(jié)果顯示,3種完全培養(yǎng)基均能促進(jìn) BMSCs的增長(zhǎng),三組之間差