不同濃度胎牛血清培養(yǎng)下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)為心肌樣細(xì)胞的比較.pdf

1、目的：
　　研究不同濃度胎牛血清培養(yǎng)下骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的一般特性如形態(tài)、核型、增殖動(dòng)力學(xué)、表型特點(diǎn)和分化成心肌樣細(xì)胞潛能等生物學(xué)性狀,并在低血清濃度下培養(yǎng)誘導(dǎo)后的心肌樣細(xì)胞，并觀察心肌樣細(xì)胞增殖和特異性蛋白的表達(dá)情況。
　　方法：
　　采用全骨髓貼壁的培養(yǎng)方法獲取大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）。在細(xì)胞傳到第2代時(shí)，分為5個(gè)組，加入含有不同濃度胎牛血清（FBS）的L-DMEM培養(yǎng)基， FBS濃度分別為0％，2.5%

2、，5%，7.5%，10%，并以濃度系數(shù)標(biāo)記各組。取第4代BMSCs，利用MTT法在（1、3、5、7、9d）檢測(cè)細(xì)胞的增殖。分別取各組傳代到第4代BMCS，加入AngII和5-Aza(AngII0.1μmol/l和5-Aza10μmol/l)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)，24h后吸棄含有誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)液，跟換新培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。取誘導(dǎo)后各組的第1代（yP1）細(xì)胞，使用MTT法檢測(cè)類心肌細(xì)胞在（1、3、5、7d）的生長(zhǎng)活力，細(xì)胞免疫熒光化學(xué)染色法檢測(cè)誘導(dǎo)后培養(yǎng)至

3、第4周時(shí)各組中cTnI, Cx-43兩類心肌相關(guān)蛋白的表達(dá)情況，并計(jì)算其表達(dá)率。
　　結(jié)果：
　　1.在5種不同濃度FBS下的L-DMEM培養(yǎng)液均可獲得第4代 BMSCs；MTT檢測(cè)細(xì)胞活力（1、3、5、7、9d）結(jié)果顯示，5組不同體積分?jǐn)?shù)的FBS培養(yǎng)液均可以促進(jìn) BMSCs的生長(zhǎng)，10%組＞2.5%，5%，7.5%組＞0%組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），2.5%，5%，7.5%組組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.0

4、5）。2.各組BMSCs在AngⅡ和5-Aza（ AngⅡ0.1μmol/L、5-Aza10μmol/L）聯(lián)合作用誘導(dǎo)時(shí)，能分化為類心肌樣細(xì)胞。誘導(dǎo)后的細(xì)胞MTT檢測(cè)細(xì)胞活力顯示10%組＞7.5%＞5%，2.5%組＞0%組（p<0.05），而5%，2.5%組比較未見(jiàn)明顯差異（p>0.05）。各組心肌樣細(xì)胞的蛋白的表達(dá)顯示10%組＞7.5%＞5%，2.5%組＞0%組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），而5%，2.5%組比較未見(jiàn)明顯差異，差異