多層面驗證共培養(yǎng)微環(huán)境誘導(dǎo)法誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞心肌樣分化.pdf

1、目的：為了多層面探討共培養(yǎng)微環(huán)境誘導(dǎo)法定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)心肌樣分化的可行性。
　　方法：取第3代MSCs與原代心肌細胞(CMs)進行共培養(yǎng)。在顯微鏡下觀察誘導(dǎo)1周后的MSCs形態(tài)學(xué)變化，用免疫熒光和實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)分別檢測誘導(dǎo)的 MSCs中心肌肌鈣蛋白I( cTnI)、α-肌動蛋白(α-actin)、Nkx-2.5和GATA-4的基因表達變化情況。采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-

2、MS/MS)分別檢測誘導(dǎo)組和對照組的代謝產(chǎn)物。
　　結(jié)果：誘導(dǎo)1周后的 MSCs形態(tài)呈心肌樣改變，cTnI、α-actin、Nkx-2.5和GATA-4的基因表達均明顯升高，正交最小偏二乘法判別分析(OPLS-DA)模型顯示誘導(dǎo)的MSCs代謝物向CMs轉(zhuǎn)變趨勢明顯。通過多元和單元統(tǒng)計分析篩選差異變量，根據(jù)一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜比對結(jié)果，最終確定12種差異代謝物。與未經(jīng)誘導(dǎo)的MSCs相比，經(jīng)誘導(dǎo)的MSCs與CMs中變化趨勢相同的差異代謝