超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠神經(jīng)元保護(hù)效應(yīng)及機(jī)制研究.pdf

1、背景：缺血性腦血管病是臨床常見病、多發(fā)病，有病死率高、致殘率高的特點(diǎn)，腦缺血后神經(jīng)元損害是其病理機(jī)制的核心部分，因而探尋神經(jīng)元保護(hù)劑是缺血性腦血管病的研究熱點(diǎn)。補(bǔ)陽(yáng)還五湯是治療該類疾病的常用方劑之一，對(duì)缺血性腦血管病的治療具有顯著療效和一定特色。 目的： (1)通過(guò)對(duì)超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯與傳統(tǒng)補(bǔ)陽(yáng)還五湯的有效成分的對(duì)比研究，探討超微復(fù)方制劑的特點(diǎn)，為中藥新型飲片的研制作出有益的探索。 (2)在建立局灶性腦缺血大鼠模型基

2、礎(chǔ)上，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探討超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制，為治療腦梗塞的臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： (1)采用一系列試驗(yàn)對(duì)超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯與傳統(tǒng)湯劑的有效成分進(jìn)行對(duì)比研究。對(duì)當(dāng)歸、赤芍、川芎、紅花、桃仁的主要有效成分進(jìn)行薄層鑒別研究，并對(duì)主要成分進(jìn)行含量測(cè)定；采用《中國(guó)藥典》收錄的相關(guān)方法檢測(cè)重金屬、砷鹽含量以明確其安全性；對(duì)水溶性浸出物和正丁醇浸出物進(jìn)行含量測(cè)定對(duì)比研究。 (2)采

3、用栓線法復(fù)制MCAO大鼠模型，隨機(jī)分成六組灌胃給藥；在1天、3天、7天、14天四個(gè)時(shí)點(diǎn)觀察各相應(yīng)指標(biāo)以探求超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)腦缺血神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。對(duì)大鼠腦缺血損傷的保護(hù)作用選用行為學(xué)變化及組織形態(tài)學(xué)變化等指標(biāo)，從對(duì)氧自由基的影響對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證；對(duì)作用機(jī)制的探求從NGF及其受體(TRKA)的表達(dá)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制(PI3K/PKB)兩個(gè)方面進(jìn)行。具體方法則為檢測(cè)血漿SOD、MDA的活性變化，用免疫組化法和分子生物學(xué)方法觀察對(duì)腦組織中N

4、GF、TRKA及PI3K、cREB、AKT的表達(dá)的影響。結(jié)果： (1)TLC測(cè)定各組供試樣品在色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且復(fù)方超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯浸泡液中主要有效成分斑點(diǎn)較傳統(tǒng)湯劑更明顯，清晰；對(duì)其主要成分的含量測(cè)定顯示超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯中黃芪甲苷含量與傳統(tǒng)湯劑相當(dāng)；對(duì)砷鹽、重金屬檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)其含量超標(biāo)；對(duì)浸出物的測(cè)定顯示超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯水溶性浸出物為傳統(tǒng)湯劑水溶性浸出物的1-22倍，正丁醇浸出物為其傳統(tǒng)湯劑的1.26倍，均高于傳統(tǒng)

5、湯劑。 (2)超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯可降低腦缺血損傷大鼠神經(jīng)功能評(píng)分，并改善腦組織缺血的病理?yè)p傷，其作用明顯優(yōu)于模型組及假手術(shù)組；超微高劑量組作用優(yōu)于傳統(tǒng)湯劑組。 (3)超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯可提高腦缺血后血中SOD活性并降MDA，其作用明顯優(yōu)于模型組及假手術(shù)組；超微高劑量組作用優(yōu)于傳統(tǒng)湯劑組。 (4)超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯可上調(diào)腦缺血后腦組織NGF及其受體TRKA的表達(dá)，并增強(qiáng)PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的表達(dá)，其作用明顯優(yōu)于模型組及假手

6、術(shù)組；超微高劑量組與傳統(tǒng)湯劑比較其影響有明顯增高的優(yōu)勢(shì)。 結(jié)論： (1)補(bǔ)陽(yáng)還五湯及其超微制劑可以改善局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分及腦組織病理變化，提高腦缺血后血液SOD活性并降低MDA活性以減弱氧自由基的毒性反應(yīng)，對(duì)腦缺血神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用。 (2)超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯保持了傳統(tǒng)補(bǔ)陽(yáng)還五湯中的有效成分，且有效成分的溶出相對(duì)傳統(tǒng)湯劑更具優(yōu)勢(shì)。 (3)超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯可提高腦缺血后腦組織神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子PI3K

7、/PKB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的表達(dá)，提高神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體表達(dá)水平，這可能是超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯對(duì)腦缺血神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用機(jī)制之一。 (4)超微補(bǔ)陽(yáng)還五湯以1/2等效劑量時(shí)即可達(dá)與傳統(tǒng)湯劑相同的作用效果，以等效劑量時(shí)其作用效應(yīng)有明顯增加的趨勢(shì)。 綜上，本論文采用藥物化學(xué)、藥理學(xué)方法以及免疫組化、分子生物學(xué)方法，以超微技術(shù)對(duì)補(bǔ)陽(yáng)還五湯復(fù)方制劑與傳統(tǒng)補(bǔ)陽(yáng)還五湯標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行對(duì)照研究，論證了超微技術(shù)在促進(jìn)中藥復(fù)方制劑(補(bǔ)陽(yáng)還五湯)有效成分