補陽還五湯對腦缺血再灌注損傷大鼠的保護作用及Akt蛋白表達的影響.pdf

1、目的:
　　腦血管病是一種致死率和致殘率都非常高的常見病，其中缺血性腦血管病約占70％-80%。缺血性腦損傷涉及非常復(fù)雜的病理生理機制，血小板功能異常為缺血性腦血管病的重要誘發(fā)因素之一。補陽還五湯是臨床用于治療缺血性腦血管病的經(jīng)典方劑。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信號傳導(dǎo)通路是體內(nèi)重要的細胞通路，其與血小板活化過程密切相關(guān)。
　　本研究在復(fù)制大鼠局灶性腦缺血模型的基礎(chǔ)上，通過對血小板活化因子（Platel

2、et Activating Factor PAF）、CD40L、CD62P的檢測，探討補陽還五湯對血小板活性的影響；并通過對PI3K/Akt信號通路中 Akt蛋白表達情況的研究，探討補陽還五湯抑制大鼠腦缺血損傷的作用機制。為中醫(yī)藥治療缺血性腦血管病提供新思路，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1.動物實驗
　　將100只SPF級SD雄性大鼠，隨機分成5組（每組20只）：假手術(shù)組，模型組，陽性（硫酸氫氯吡格雷）組

3、（6.8mg·kg-1），補陽還五湯高、低劑量組（26，13g·kg-1）。假手術(shù)組和模型組給予蒸餾水。給藥劑量根據(jù)動物體表面積公式換算。連續(xù)給藥14天后，采用改良線栓法復(fù)制大鼠大腦中動脈栓塞（MCAO）再灌注模型，腦缺血1小時再灌注6小時之后進行神經(jīng)功能缺失評分。
　　2.檢測指標和方法
　　采用氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法檢測腦梗死面積；采用蘇木精-伊紅（HE）染色法觀察大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞形態(tài)變化；采用

4、水溶性四氮唑（WST）-1法檢測腦組織SOD活性，采用硫代巴比妥酸（TBA）法檢測血清MDA含量；采用酶聯(lián)免疫（Elisa）法檢測血清中PAF、CD40L、CD62P含量；采用免疫組織化學(xué)方法（IHC）檢測腦組織海馬區(qū)中p-Akt(Ser473)和Akt(Ser473)蛋白表達；采用免疫印跡法（WB）檢測腦組織海馬區(qū)中p-Akt和Akt蛋白表達的變化情況。
　　結(jié)果
　　神經(jīng)功能評分，TTC染色結(jié)果證明大鼠MCAO再灌注模型

5、復(fù)制成功。補陽還五湯高、低劑量組能降低MCAO再灌注大鼠神經(jīng)功能缺失評分，減少腦梗死面積，改善腦組織海馬CA1區(qū)、皮質(zhì)區(qū)病理損傷，改善神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)和細胞核固縮情況，緩解神經(jīng)系統(tǒng)損傷；升高腦組織中總SOD活性，降低血清中MDA含量，改善自由基平衡狀態(tài)；降低血清中PAF、CD40L、CD62p含量，抑制血小板活化；升高腦組織中p-Akt蛋白含量，激活PI3K/Akt信號傳導(dǎo)通路。以補陽還五湯高劑量組效果為佳。
　　結(jié)論
　　補陽