脾切除治療小鼠自身免疫性肝炎肝纖維化的作用和機制探討.pdf

1、一、脾切除對AIH小鼠肝纖維化的預(yù)防和治療作用
　　目的:
　　通過少量多次小鼠尾靜脈注射刀豆蛋白A(Concanavalin A，ConA)，建立小鼠自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)肝纖維化模型。在造模前行脾切除術(shù)，觀察脾切除能否延緩小鼠AIH肝纖維化的進展。在造模后行脾切除術(shù)，觀察單純脾切除以及脾切除聯(lián)合硫唑嘌呤(azathioprine，AZA)對AIH肝纖維化小鼠的治療作用。

2、　　方法:
　　(1)將Balb/c小鼠隨機分為4組，A組、B組、C組分別經(jīng)尾靜脈注射10mg/kg、12.5mg/kg、15mg/kg劑量的ConA，D組為對照組注射PBS，每周一次。于注射ConA的3、5、7、9周分批處死小鼠測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine transaminase，ALT)，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase，AST)，取肝臟組織作HE及Masson染色。(2)

3、將小鼠隨機分為4組，脾切除+ConA組在造模前行脾切除術(shù)，假手術(shù)+ConA組在造模前行假手術(shù)，ConA組在造模前未處理，正常對照組。分別于注射ConA的第1、4、7周分批處死小鼠測血清ALT、AST，肝組織作HE及Masson染色。(3)將小鼠隨機分為5組，脾切除治療組在造模后予脾切除術(shù)治療，假手術(shù)治療組在造模后予假手術(shù)治療，脾切除+AZA治療組在造模后予脾切除術(shù)和AZA灌胃治療，假手術(shù)+AZA治療組在造模后予假手術(shù)和AZA灌胃治療，對

4、照組在造模后未處理。分別于治療后第1、4、8周測血常規(guī)，肝組織作HE及Masson染色。
　　結(jié)果:
　　(1)每次注射ConA后，小鼠的ALT、AST均高于對照組(P＜0.05)，且隨著注射劑量的增加，小鼠ALT、AST的升高越明顯(P＜0.05)。病理結(jié)果顯示A組第9周開始出現(xiàn)肝纖維化，但不明顯;B組第7周有明顯的肝纖維化;C組第5周出現(xiàn)明顯肝纖維化，但該組小鼠致死率高。(2)脾切除+ConA組小鼠的ALT、AST較對照

5、組有所升高(P＜0.05)，但低于假手術(shù)+ConA組和ConA組(P＜0.05)。病理結(jié)果顯示脾切除+ConA組第1、4周肝臟炎癥和淋巴細(xì)胞浸潤程度較假手術(shù)和對照組輕;脾切除+ConA組第7周未見肝纖維化，而假手術(shù)+ConA組和ConA組均有明顯肝纖維化。(3)脾切除治療組和脾切除+AZA治療組小鼠的WBC、PLT水平在第1周較低，于治療后第4周達高峰，隨后下降。對照組、假手術(shù)治療組和假手術(shù)+AZA治療組小鼠的WBC、PLT水平逐漸下降

6、。與對照組相比，脾切除治療組、假手術(shù)+AZA治療組和脾切除+AZA治療組在治療后，肝纖維化逐漸減輕，而脾切除+AZA治療組減輕程度最明顯，且假手術(shù)+AZA治療組小鼠死亡率高。假手術(shù)治療組的肝臟病理表現(xiàn)與對照組相似，肝纖維化明顯。
　　結(jié)論:
　　(1) Balb/c小鼠每周一次經(jīng)尾靜脈注射12.5mg/kg劑量的ConA，注射7周可以建立肝纖維化動物模型。(2)脾切除能夠延緩小鼠AIH肝纖維化的進展，預(yù)防肝纖維化的發(fā)生。(3

7、)脾切除不僅對AIH小鼠的肝纖維化具有治療作用，而且提高了硫唑嘌呤的耐受性和治療效果。
　　二、脾切除對AIH肝纖維化小鼠肝臟Th2細(xì)胞因子的影響
　　目的:
　　探討Th2細(xì)胞因子在ConA誘導(dǎo)的急性模型中的變化及Th2細(xì)胞因子在ConA誘導(dǎo)的肝纖維化模型中的變化以及脾切除對ConA誘導(dǎo)的肝纖維化模型Th2細(xì)胞因子的影響。
　　方法:
　　(1)取36只Balb/c小鼠以15mg/kg劑量的ConA經(jīng)尾靜

8、脈注射，對照組注射PBS，于注射ConA的1h、2h、4h、6h、12h、24h隨機處死六只小鼠取肝臟，用RT-PCR方法檢測肝臟中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表達水平。(2)將小鼠隨機分為4組，脾切除+ConA組在造模前行脾切除術(shù)，假手術(shù)+ConA組在造模前行假手術(shù)，ConA組在造模前未處理，正常對照組。分別于注射ConA的第1、4、7周分批處死小鼠取肝臟，用RT-PCR方法檢測肝臟中IL-4、IL-5和IL-13的mRN

9、A表達水平。
　　結(jié)果:
　　(1) ConA誘導(dǎo)的急性模型中，小鼠肝臟中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表達水平于注射ConA后1h開始增加，IL-4水平于6h達高峰，IL5和IL-13于2h達高峰。(2) ConA誘導(dǎo)的肝纖維化模型中，小鼠肝臟中IL-4、IL-5和IL-13的mRNA表達水平隨注射次數(shù)的增加而升高，均于ConA注射第7周達峰。脾切除+ConA組小鼠在注射ConA后肝臟IL-4、IL-5和IL-1