刺參（Apostichopus japonicus）的遺傳學(xué)研究.pdf

1、1.刺參EST-SSR分子標(biāo)記的開發(fā)與評(píng)價(jià)利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)資源，在刺參EST數(shù)據(jù)庫(kù)中查找包含微衛(wèi)星的序列，開發(fā)了11個(gè)EST-SSR分子標(biāo)記，并用采自煙臺(tái)的30個(gè)刺參個(gè)體進(jìn)行評(píng)價(jià)。所有位點(diǎn)的等位基因數(shù)目范圍為3-10個(gè)。期望和觀測(cè)雜合度值范圍分別為0.378-0.870和0.077-0.690。11個(gè)位點(diǎn)中有8個(gè)位點(diǎn)由于純合子過(guò)剩而顯著偏離哈迪-溫伯格平衡，說(shuō)明可能有大量的無(wú)效等位基因的存在。11個(gè)EST-SSR標(biāo)記的開發(fā)，為刺參群體遺傳

2、以及比較基因組學(xué)研究提供了有力的遺傳工具。 2.刺參養(yǎng)殖和野生群體的遺傳多樣性研究利用8對(duì)微衛(wèi)星引物對(duì)中國(guó)北方5個(gè)刺參養(yǎng)殖群體和2個(gè)野生群體進(jìn)行遺傳多樣性分析。在8個(gè)位點(diǎn)中均檢測(cè)到了很高的多態(tài)性。7個(gè)群體的平均等位基因數(shù)和期望雜合度分別為10.4-12.3和0.735-0.783。結(jié)果顯示目前中國(guó)北方養(yǎng)殖刺參與野生刺參相比，遺傳多樣性水平并沒(méi)有出現(xiàn)顯著的降低。說(shuō)明經(jīng)過(guò)20多年的養(yǎng)殖過(guò)程，中國(guó)北方的養(yǎng)殖刺參群體依然保持了較高的遺傳

3、多樣性。由于地理的隔離和養(yǎng)殖模式的影響，大部分養(yǎng)殖和野生群體之間已經(jīng)出現(xiàn)了明顯的遺傳分化：Fst值范圍為0.008-0.036，兩個(gè)野生群體之間還沒(méi)有產(chǎn)生顯著的遺傳分化(Fst=0.008)。研究結(jié)果為刺參養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性保護(hù)以及選擇育種研究提供了重要的參考數(shù)據(jù)。 3.刺參遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建用21個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記、37對(duì)AFLP標(biāo)記，利用親本和88個(gè)子代個(gè)體構(gòu)建第一張刺參的遺傳連鎖圖譜。除去偏分離標(biāo)記，利用其它有效標(biāo)記分別構(gòu)建了

4、刺參的雌性和雄性連鎖圖譜。雌性框架圖譜有141個(gè)標(biāo)記定位在17個(gè)連鎖群上，覆蓋基因組的長(zhǎng)度為1291cM，平均間隔為10.4 cM；雄性框架圖譜有125個(gè)標(biāo)記定位于18個(gè)連鎖群上，覆蓋基因組945.7 cM，平均間隔8.8 cM。刺參雌、雄框架圖的覆蓋率分別為77.6％和74.4％。該圖譜的建立為進(jìn)一步開展刺參QTL分析以及分子標(biāo)記輔助育種奠定的基礎(chǔ)。 4.刺參線粒體遺傳模式的研究為了研究線粒體在刺參中的遺傳規(guī)律，對(duì)20組刺參家

5、系親本線粒體COI基因進(jìn)行擴(kuò)增，得到約540bp的片段。通過(guò)DGGE電泳技術(shù)從中篩選出5組親本間存在差異的組合，將每組2個(gè)親本和20個(gè)子代放在一起進(jìn)行DGGE電泳分析，對(duì)其遺傳模式進(jìn)行探討。結(jié)果顯示在來(lái)自這5組家系的100個(gè)后代中僅檢測(cè)到母本的單倍型，刺參的線粒體遺傳模式表現(xiàn)為典型的母系遺傳。 5.4種海參16S rRNA和COI基因片段序列比較及系統(tǒng)學(xué)研究采用PCR技術(shù)對(duì)山東榮成、長(zhǎng)島、俄羅斯和日本的刺參(Apostichop

6、us japonicus)，黃乳海參(Holothuria fuscogilva)，北大西洋瓜參(Cucumaria frondosa)，二色桌片參(Mensamaria intercedens)的16S rRNA和COI基因片段進(jìn)行了擴(kuò)增和測(cè)序，分別得到了長(zhǎng)度約為500 bp和540 bp的片段。通過(guò)統(tǒng)計(jì)變異位點(diǎn)，平均核苷酸差異數(shù)，核苷酸多樣性指數(shù)進(jìn)行基因序列變異分析。結(jié)果表明，在16S rRNA、COI基因片段中，長(zhǎng)島和榮成刺參序列