小鼠樹突狀細胞上4-1BB分子的功能研究.pdf

1、樹突狀細胞(DCs)是體內功能最強的專職抗原遞呈細胞(APC)，能攝取并加工處理免疫原性多肽，以MHC分子-抗原肽復合物形式表達于細胞表面，MHC分子/抗原肽復合物能被抗原特異性T細胞受體(TCR)識別，聯(lián)合DCs表面的共刺激分子，為T細胞相關免疫反應提供了啟動信號，進而通過輔助型T細胞調節(jié)B細胞增值，在免疫應答和免疫耐受的誘導中具有獨特的地位，是介導先天性免疫和獲得性免疫的橋梁。 DCs以未成熟狀態(tài)廣泛分布于人體各器官，在攝取

2、抗原或接受到炎癥因子如LPS、IL-1、TNF-α、CD40配體刺激后，DCs吞噬能力下降，表面黏附分子表達發(fā)生改變，CD80、CD86、MHC Ⅱ等表面分子表達升高，進入成熟狀態(tài)，轉移到淋巴結T細胞區(qū)域，刺激T細胞分化增殖，從而啟動免疫應答。 4-1BB分子(CD137)為Ⅰ型糖蛋白，是腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族的重要成員。4-1BB分子首先發(fā)現(xiàn)于小鼠活化T細胞表面，在NK細胞、NKT細胞、CD4+CD25+調節(jié)性T細胞

3、和骨髓來源的單核、多個核細胞上都有表達，該分子提供的共刺激信號能有效促進CD4+、CD8+T細胞增殖以及細胞因子分泌，維持T細胞較長時間克隆擴增并拮抗活化誘導凋亡(AICD)。最近有研究表明，DCs也可組成型表達4-1BB分子，并且該分子介導的信號能促進DCs表型的改變以及功能的成熟。 本研究使用4-1BB激發(fā)型抗體2A激發(fā)經(jīng)過磁珠純化的小鼠骨髓來源樹突狀細胞(BMDC)表面4-1BB分子，以揭示DCs表面4-1BB分子的功能。

4、 本文第一部分研究了4-1BB分子激發(fā)對腫瘤上清誘導的DCs凋亡的拮抗作用。研究結果表明，通過4-1BB激發(fā)型抗體2A激發(fā)DCs上4-1BB信號可以有效對抗小鼠黑色素瘤B16上清所誘導的DCs凋亡，和CD40激發(fā)型抗體lcl0所介導的CD40信號效果類似但較弱。進一步研究發(fā)現(xiàn)，激發(fā)4-1BB信號可以誘導DCs胞內NF-κB p65亞基從胞漿向核內轉移，表明DCs上4-1BB信號可能通過包含NF-κB在內的胞內信號傳導途徑達到抗凋

5、亡功能。 第二部分研究了經(jīng)過4-1BB激發(fā)成熟的DCs對T細胞的影響。檢測表明，淋巴細胞混合培養(yǎng)3~5天后，CD40和4-1BB信號刺激后DCs組均可在顯微鏡下觀察到CD4+T細胞的增殖。在培養(yǎng)第5天，我們檢測到CD40和4-1BB信號刺激后DCs可使部分CD4+T表面出現(xiàn)Th1細胞標志性分子Tim3的表達。這說明經(jīng)過4-1BB信號刺激分化成熟的DCs能有效刺激CD4+T細胞向Th1細胞分化增殖。但在增殖的同時，和CD40信號組

6、不同，我們觀察到4-1BB信號組出現(xiàn)強烈T細胞凋亡，并且凋亡率隨著時間的增加而增長。 本研究表明，DCs上4-1BB信號的激活能通過包含NF-κB通路在內的胞內信號傳導途徑向DCs傳遞一個免疫信號，增強DCs對抗腫瘤上清誘導凋亡的能力，并能通過激活DCs,刺激部分CD4+T細胞向Th1細胞分化增殖。但同時，4-1BB信號活化的DCs可能通過某種途徑誘導活化的CD4+T細胞凋亡。這些研究結果將為4-1BB激發(fā)型抗體的腫瘤免疫治療和