尼古丁增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞功能的機(jī)制研究.pdf

1、樹突狀細(xì)胞(DCs)是功能最強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞(APC),可以誘導(dǎo)抗原特異性的CTL反應(yīng)。有研究報(bào)道,在小鼠實(shí)驗(yàn)中DCs聯(lián)合負(fù)載抗原肽可以預(yù)防和治療腫瘤。近年,尼古丁已經(jīng)成為神經(jīng)退行性疾病、結(jié)腸癌和唐氏綜合癥的治療性藥物。前期研究發(fā)現(xiàn)尼古丁處理的未成熟樹突狀細(xì)胞(imDCs)具有抗腫瘤效應(yīng),但并未對(duì)尼古丁增強(qiáng)DCs功能的機(jī)制進(jìn)行深入探討。本研究首先以尼古丁刺激自骨髓誘導(dǎo)的imDCs,分別以流式細(xì)胞術(shù)、WesternBlot和RT-PC

2、R檢測(cè)尼古丁刺激對(duì)DCs表達(dá)CD11c、α7 nAChR、4-1BBL和OX40L的影響;其次,以BrdU摻入試驗(yàn)和ELISA分別檢測(cè)尼古丁刺激對(duì)DCs介導(dǎo)的抗原特異性T細(xì)胞增殖反應(yīng)和IL-12分泌的影響;再以BrdU摻入試驗(yàn)和ELISPOT探討DCs表面共刺激分子CD80/CD86和4-1BBL在尼古丁增強(qiáng)DCs功能中的作用及腫瘤預(yù)防作用;繼以信號(hào)通路抑制劑,通過Western Blot和BrdU摻入試驗(yàn)分別檢測(cè)了尼古丁上調(diào)DCs表面

3、分子α7 nAChR、4-1BBL和OX40L表達(dá)的機(jī)制;最后以BrdU摻入試驗(yàn)和ELISA對(duì)比評(píng)估了尼古丁和IFN-γ對(duì)DCs功能的增強(qiáng)效果。
　　 結(jié)論如下:第一,在蛋白水平,尼古丁刺激可以上調(diào)DCs CD11c、α7 nAChR和OX40L的表達(dá),而尼古丁刺激DCs在蛋白水平和mRNA水平都能增加4-1BBL表達(dá);第二,尼古丁刺激能夠增強(qiáng)抗原特異性T細(xì)胞增殖反應(yīng)及IL-12分泌;第三,封閉CD80、CD86和4-1BBL的

4、作用均能有效逆轉(zhuǎn)尼古丁對(duì)DCs介導(dǎo)的T細(xì)胞增殖反應(yīng)、CTLs誘生和抗腫瘤功能;第四,尼古丁能快速激活DCs的Jak2、c-Raf、MEK1/2、Erk1/2、p38MAPK.、PI3K、Akt及mTOR的磷酸化;第五,尼古丁主要通過PI3K/Akt信號(hào)通路上調(diào)α7 nAChR、4-1BBL和OX40L表達(dá),MEK/Erk信號(hào)通路也參與了上調(diào)4-1BBL表達(dá);最后,發(fā)現(xiàn)尼古丁和2 ng/ml IFN-γ在DCs介導(dǎo)的T細(xì)胞增殖反應(yīng)中有同樣