重組共表達(dá)質(zhì)粒pIRES-hVEGF-,121-cDNA-hBMP-4在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)及對其分化的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：觀察重組共表達(dá)質(zhì)粒LRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal Stem Cells，MSCs)后的表達(dá)及其對大鼠MSCs向成骨細(xì)胞分化的影響，為骨缺損的聯(lián)合基因治療奠定基礎(chǔ)。 方法：使用全骨髓培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)大鼠MSCs；流式細(xì)胞儀檢測MSCs表面標(biāo)志抗原的表達(dá)；重組共表達(dá)質(zhì)粒pLRS-hVEGF121cDNA/hBMP-4經(jīng)酶切鑒定后，在脂質(zhì)體介導(dǎo)下將其轉(zhuǎn)入大鼠MSC

2、s，提取總RNA和總蛋白，進(jìn)行RT-PCR和Westem blot檢測；茜素紅染色檢測轉(zhuǎn)染后大鼠MSCs的成骨分化能力。 結(jié)果：流式細(xì)胞儀檢測顯示CD90表達(dá)強(qiáng)陽性，CD45表達(dá)陰性；重組共表達(dá)質(zhì)粒plRES-hVEGF121cDNA/hBMP-4成功轉(zhuǎn)染至大鼠MSCs中，并獲得有效轉(zhuǎn)錄和共表達(dá)；轉(zhuǎn)染后第14天，茜素紅染色陽性。 結(jié)論： hVEGF121和hBMP-4在大鼠MSCs中獲有效轉(zhuǎn)錄和共表達(dá)，并能誘導(dǎo)大鼠MSC

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