骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植影響脊髓損傷大鼠TLR4表達(dá)的研究.pdf

1、研究背景:
　　脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)致殘率高，治療困難，一直是醫(yī)學(xué)界的一大難題。脊髓損傷是脊椎外傷最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，經(jīng)常會導(dǎo)致?lián)p傷節(jié)段以下肢體的功能障礙甚至截癱。脊髓損傷不但給患者本人帶來了身心上的嚴(yán)重創(chuàng)傷，而且給社會國家造成了巨大的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。脊髓損傷包括原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷，原發(fā)性損傷可直接造成損傷部位的細(xì)胞死亡，繼發(fā)性損傷則主要包括炎癥反應(yīng)、興奮性毒性、血管破壞所致的缺血壞死、再灌注損傷

2、和自由基等。炎癥反應(yīng)是脊髓繼發(fā)性損傷的重要進(jìn)程，而小膠質(zhì)細(xì)胞的活化則是脊髓炎癥反應(yīng)過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。小膠質(zhì)細(xì)胞表面表達(dá)豐富的跨膜受體蛋白Toll樣受體4(TLR4)，并且通過TLR4識別各種配體激活下游的信號通路，釋放炎性因子，介導(dǎo)脊髓炎癥反應(yīng)，引起脊髓繼發(fā)性損傷。
　　近年來，許多人致力于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)移植治療脊髓損傷的研究，大量研究表明，BMSCs移植能夠有效減輕脊髓損傷，促進(jìn)神經(jīng)功能修復(fù)，已經(jīng)證實的作用機制包

3、括營養(yǎng)作用、替代作用、橋接作用、誘導(dǎo)作用等。有研究發(fā)現(xiàn)BMSCs能夠通過抑制肺組織TLR4的表達(dá)以減輕肺損傷，然而有關(guān)BMSCs對介導(dǎo)脊髓炎癥的TLR4信號通路影響的報道較少。
　　本實驗通過建立大鼠脊髓損傷模型并靜脈移植BMSCs，研究BMSCs移植對損傷脊髓TLR4表達(dá)的影響，探討B(tài)MSCs移植可能通過哪些機制減輕脊髓炎癥反應(yīng)、治療脊髓損傷。
　　研究目的:
　　驗證大鼠BMSCs體外培養(yǎng)及鑒定的方法，研究脊髓損傷

4、大鼠進(jìn)行BMSCs移植后TLR4表達(dá)的變化，探討B(tài)MSCs移植可能通過哪些機制治療脊髓損傷。
　　研究方法:
　　取4周齡雄性Wistar大鼠分離股骨及脛骨骨髓并在體外培養(yǎng)BMSCs，觀察細(xì)胞生長形態(tài)并鑒定第3代BMSCs，收集備用。取8周齡雄性Wistar大鼠90只，隨機分為3組，每組30只，分別是假手術(shù)對照組、脊髓損傷組和細(xì)胞移植組，脊髓損傷組用Allen's打擊器建立脊髓損傷模型，細(xì)胞移植組建立脊髓損傷模型后尾靜脈移植

5、BMSCs。分別于術(shù)后24h、72h、7d將實驗大鼠處死，獲取損傷中心長約1cm的脊髓段，分別應(yīng)用免疫組織化學(xué)法、實時熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測脊髓組織TLR4的表達(dá)。
　　研究結(jié)果:
　　BMSCs體外培養(yǎng)生長良好，大部分為長梭形，免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示CD44染色陽性，呈棕黃色，CD34染色陰性。
　　免疫組化和實時熒光定量PCR結(jié)果顯示:假手術(shù)對照組TLR4表達(dá)在三個時間點無明顯變化，脊髓損傷組和細(xì)胞移