微型載體無保護(hù)劑冷凍微量精子的初步研究.pdf

1、第一部分精子冷凍環(huán)無保護(hù)劑玻璃化冷凍方法的實(shí)驗(yàn)研究 目的：通過探討冷凍環(huán)無保護(hù)劑玻璃化冷凍微量精子的可行性，試圖尋找一種適合于睪丸或附睪微量精子的冷凍方法。 方法：正常標(biāo)本上游處理后分別進(jìn)行慢速冷凍和冷凍環(huán)無保護(hù)劑的玻璃化冷凍，復(fù)蘇后分別從活動(dòng)率及電鏡下超微結(jié)構(gòu)等指標(biāo)來比較兩種冷凍方法的效果。 結(jié)果：兩種方法冷凍后其活動(dòng)率之間差異無顯著性(44.5％vs43.5％，P＞0.05)，但均較未冷凍時(shí)明顯下降(44.5

2、％vs43.5％vs88.5％，P＜0.001)。超微結(jié)構(gòu)亦較未冷凍時(shí)發(fā)生了一定的改變，但核結(jié)構(gòu)基本保持完整。 結(jié)論：精子冷凍環(huán)無保護(hù)劑的玻璃化冷凍是一種簡(jiǎn)單、方便而有效的冷凍方法；冷凍環(huán)有望成為適合于睪丸或附睪微量精子冷凍的一種新型載體第二部分微滴法無保護(hù)劑玻璃化冷凍正常精子的可行性探討 目的：探討在不添加冷凍保護(hù)劑的情況下微滴法玻璃化冷凍正常精子的可行性 方法：收集16份正常精液標(biāo)本，上游處理后分別進(jìn)行慢速

3、冷凍和微滴法冷凍，微滴法即用拉細(xì)巴氏管將標(biāo)本形成10ul的液滴，直接投入液氮內(nèi)凍存，復(fù)蘇后鏡檢其活動(dòng)率。 結(jié)果：兩種方法冷凍后其活動(dòng)率之間差異無顯著性(40％vs37.5％，P＞0.05)，但均較未冷凍時(shí)明顯下降(40％vs37.5％vs85％，P＜0.001)。 結(jié)論：無保護(hù)劑的微滴法玻璃化冷凍正常人類精子可以取得較理想的結(jié)果；但需進(jìn)一步探索以提高其復(fù)蘇率。 第三部分微滴法無保護(hù)劑玻璃化冷凍PESA精子的可行性

4、探討 目的：探討微滴法無保護(hù)劑玻璃化冷凍PESA精子的可行性 方法：收集12份PESA精子標(biāo)本，洗滌處理后進(jìn)行無保護(hù)劑的微滴法冷凍，用拉細(xì)巴氏管將標(biāo)本形成10ul的液滴，直接投入液氮內(nèi)凍存，復(fù)蘇后鏡檢其活動(dòng)率。 結(jié)果：將復(fù)蘇后活動(dòng)精子數(shù)大于30個(gè)作為復(fù)蘇成功的指標(biāo)，12份標(biāo)本有8份復(fù)蘇成功，復(fù)蘇成功率為66.7％。 結(jié)論：微滴法無保護(hù)劑玻璃化冷凍PESA精子可以取得一定的成功率；無保護(hù)劑的微滴法是微量精子