豬干擾素α、β、γ在293T細胞中的表達研究.pdf

1、干擾素(Interferon，IFN)是一種具有抗病毒，影響細胞生長、分化和免疫調節(jié)等功能的蛋白質，在獸醫(yī)臨床上，干擾素在對疾病的預防、治療以及疫苗佐劑的應用等方面發(fā)揮著重要作用。 目前，IFN已廣泛應用于人醫(yī)臨床多種疾病的治療。相對而言，獸醫(yī)界對動物干擾素的研究起步較晚。由病毒、細菌等病原微生物侵染動物所引起的各種傳染性疾病嚴重制約了各個國家和地區(qū)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，同時也對人類健康存在著巨大危害。因此，動物干擾素的研究對動物傳

2、染性疾病的防治具有重大的經(jīng)濟價值和社會意義。本研究以豬干擾素α[(PoIFN-α)、豬干擾素β(PoIFN-β)與豬干擾素γ(PoIFN-γ)為研究對象，構建了pcDNA3.1-EGFP-PoIFN-α/β/γ(命名為pcDNA3.1-IFN-α/β/γ)和rAAV-PoIFN-α/β/γ(命名為AAV-PoIFN-α/β/γ)真核表達載體，并轉染哺乳動物細胞293T，Western-blot檢測到了29T細胞中干擾素蛋白。 主

3、要研究內容如下： 1.pcDNA3.1-IFN質粒構建和制備 根據(jù)本實驗室已擴增到的PoIFN-α/β/γ全長基因設計引物，在PoIFN-α/β/γ上下游引入NheI和HindIII酶切位點，以PoIFN-α/β/γ全長基因為模板，PCR擴增得到PoIFN-α/β/γ基因，將該基因亞克隆到pcDNA3.1-IFN載體上，轉化大腸桿菌DH5α，挑選單菌落，LB培養(yǎng)基培養(yǎng)，菌液PCR鑒定，經(jīng)測序鑒定獲得正確pcDNA3.1-

4、PoIFNd質粒，擴大培養(yǎng)，大量提取質粒并純化。 2.rAAV-IFN質粒構建和制備 根據(jù)本實驗室已擴增到的PoIFN-α/β/γ長基因設計引物，使得PoIFN-α/β/γ上下游引入EcoRI和HindIII酶切位點，以PoIFN-α/β/γ全長基因為模板，PCR擴增得到PoIFN-α/β/γ基因，將該基因亞克隆到AAV載體上，轉化大腸桿菌DH5α，挑選單菌落，LB培養(yǎng)基培養(yǎng)，菌液PCR鑒定，證明獲得正確AAV-PoIF