重組人胸腺素β4二聚體的心臟保護(hù)功能研究.pdf

1、人胸腺素β4(Thymosinβ4,Tβ4)是一個由43個氨基酸組成的酸性小肽,在物種中高度保守,廣泛分布于除紅細(xì)胞外的大部分細(xì)胞中。它參與人體許多重要的生命活動,能夠促進(jìn)傷口愈合,促進(jìn)毛發(fā)生長、抗炎、促進(jìn)組織修復(fù),抗內(nèi)毒素性休克、促血管生成,維持細(xì)胞骨架的動態(tài)平衡等。目前 Tβ4對于多種創(chuàng)傷性疾病以及心肌梗死后心臟保護(hù)作用的研究均已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。然而現(xiàn)階段使用的Tβ4均來源于化學(xué)合成。長度為43個氨基酸的多肽化學(xué)合成效率低,造價高

2、,且環(huán)境污染嚴(yán)重,大規(guī)模生產(chǎn)限制性大。Tβ4的基因工程產(chǎn)品又因其分子較小,原核表達(dá)后易降解而難于純化。在前期研究中,我們利用基因工程方法制備了 Tβ4二聚體蛋白,克服了化學(xué)合成和原核表達(dá)的缺陷。該二聚體蛋白的促傷口愈合活性明顯高于單體且純化方法簡單易行。該二聚體蛋白的構(gòu)建,純化方法和大規(guī)模生產(chǎn)工藝,獲得兩項(xiàng)中國發(fā)明專利(ZL200810232709.9;ZL201110376361.2)。對于該二聚體蛋白促傷口愈合功能的研究獲得國家新藥

3、創(chuàng)制重大專項(xiàng)的資助(2011ZXJ09104-01)。本課題在上述基礎(chǔ)上,將進(jìn)一步研究 Tβ4二聚體蛋白在心肌梗死后的心臟保護(hù)作用,并對其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討,為拓展該基因工程藥物的適應(yīng)癥奠定基礎(chǔ)。
　　本實(shí)驗(yàn)通過結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、小管形成、流式細(xì)胞術(shù)及激光共聚焦檢測Tβ4②的生物學(xué)活性,通過構(gòu)建小鼠心梗模型驗(yàn)證Tβ4②對心肌梗死后的心臟保護(hù)功能,通過熒光實(shí)時定量PCR對Tβ4二聚體的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。結(jié)晶紫實(shí)驗(yàn)證明了Tβ

4、4二聚體促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)增殖;劃痕實(shí)驗(yàn)證明了Tβ4二聚體促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移;小管形成實(shí)驗(yàn)證明了 Tβ4二聚體能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的血管形成;激光共聚焦實(shí)驗(yàn)證明了 Tβ4二聚體能夠抑制心臟成纖維細(xì)胞分泌膠原;流式細(xì)胞術(shù)證明了 Tβ4二聚體能夠抑制缺氧引發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡。通過構(gòu)建小鼠心梗模型,證明了 Tβ4二聚體能夠增加梗死區(qū)邊緣的血管密度,減少梗死面積,控制心肌肥大,提高心臟功能。熒光實(shí)時定量PCR證明了Tβ4二聚體可上調(diào)A