超聲裂解聯(lián)合16S rRNA PCR在假體周圍感染診斷中的應(yīng)用.pdf

1、背景:
　　人工關(guān)節(jié)感染是關(guān)節(jié)置換手術(shù)一個不能完全避免的并發(fā)癥。盡管其發(fā)生率不高，但由于早期診斷困難，治療復(fù)雜，常導(dǎo)致重復(fù)感染、骨質(zhì)嚴(yán)重缺損、關(guān)節(jié)功能障礙甚至截肢，顯著增加治療費(fèi)用，給病人和社會造成極大的負(fù)擔(dān)。目前，在假體周圍組織或關(guān)節(jié)液中培養(yǎng)出細(xì)菌是診斷人工關(guān)節(jié)感染的金標(biāo)準(zhǔn)。然而，并不是所有假體周圍感染的病例都可以得到陽性微生物培養(yǎng)結(jié)果。
　　第一部分超聲裂解在人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后感染診斷中的應(yīng)用
　　目的：致病菌在假體

2、表面所形成的生物被膜被認(rèn)為是細(xì)菌培養(yǎng)假陰性和治療反復(fù)遷延不愈的主要原因。超聲裂解通過破壞假體表面的細(xì)菌生物膜，使病原菌得以釋放，從而提高細(xì)菌培養(yǎng)。本研究即利用此項(xiàng)技術(shù)，探討其在人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后感染診斷中的效率。
　　方法：對臨床可疑假體周圍感染或考慮假體無菌性松動的病人（共46例）進(jìn)行翻修手術(shù)。將翻修術(shù)中取出的假體進(jìn)行超聲震蕩處理，并將所得的裂解液進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)。比較普通細(xì)菌培養(yǎng)及超聲裂解的敏感性及特異性。
　　結(jié)果：組織

3、及關(guān)節(jié)液常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)的診斷效率無差異。超聲裂解的敏感性(64.71％,95%CI:0.46-0.80)高于普通細(xì)菌培養(yǎng)(32.35%,95%CI:0.17-0.50，P<0.05)。結(jié)論：超聲裂解可以提高假體周圍感染病原學(xué)檢出率。
　　第二部分基于16S rRNA的PCR檢測技術(shù)在人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后感染診斷中的應(yīng)用
　　目的：基于細(xì)菌基因高度保守區(qū)域的16S rRNA基因的序列比對鑒定技術(shù)，是一種建立在基因文庫及生物信息學(xué)技術(shù)

4、上的較為成熟的細(xì)菌快速鑒定方法。本研究即是利用此技術(shù)，探討其在診斷假體周圍感染的效率。
　　方法：分析6例無菌性松動及22例假體周圍感染行人工髖關(guān)節(jié)翻修患者的資料，根據(jù)細(xì)菌16S rRNA保守基因片段設(shè)計(jì)引物，并采用普通PCR及Real time PCR方法檢測假體周圍組織、關(guān)節(jié)液中的細(xì)菌以診斷假體周圍感染。同時，將翻修術(shù)中所取得的組織、關(guān)節(jié)液標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)；比較組織及關(guān)節(jié)液普通細(xì)菌培養(yǎng)敏感性，比較組織、關(guān)節(jié)液常規(guī)培養(yǎng)及16

5、S rRNA PCR方法檢出細(xì)菌的敏感性。結(jié)果：組織及關(guān)節(jié)液常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)的診斷效率無差異。Real time-PCR方法用于關(guān)節(jié)液的微生物檢出相較于傳統(tǒng)PCR方法升高，但用于組織中微生物的檢出并未明顯提高。同時，PCR方法并未較普通培養(yǎng)靈敏度高。
　　結(jié)論：16S rRNA PCR方法在假體周圍感染組織及關(guān)節(jié)液的檢出率尚不明確。
　　第三部分超聲裂解聯(lián)合16S rRNA Real-time PCR診斷人工關(guān)節(jié)感染
　　

6、目的：超聲裂解聯(lián)合16S rRNA Real-time PCR技術(shù)在人工關(guān)節(jié)感染診斷中應(yīng)用尚不明確，因此本研究旨在探討其在在診斷假體周圍感染的效率。
　　方法：分析29例因假體周圍感染或假體無菌性松動而行人工髖關(guān)節(jié)翻修患者，將翻修術(shù)中取出的假體進(jìn)行超聲震蕩處理，并經(jīng)所得裂解液進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)及PCR檢測。比較超聲裂解及超聲裂解聯(lián)合PCR方法的敏感性、特異性。
　　結(jié)果：超聲裂解液培養(yǎng)及超生裂解聯(lián)合PCR的診斷效率無明顯差異，