淋巴母細(xì)胞淋巴瘤組織中Bcl-2、Bcl-6和c-Myc蛋白表達(dá)與基因異常的相關(guān)性研究及預(yù)后分析.pdf

1、目的：
　　 淋巴母細(xì)胞淋巴瘤是一類來源于不成熟前體淋巴細(xì)胞的罕見的非霍奇金淋巴瘤，其發(fā)病率約占所有非霍奇金淋巴瘤的2％，但惡性程度極高，尤其好發(fā)于兒童和青壯年。目前對淋巴母細(xì)胞淋巴瘤的研究并不清晰、透徹，尤其在分子遺傳學(xué)機(jī)制方面尚需深入研究。淋巴母細(xì)胞淋巴瘤是否也具有典型的蛋白表達(dá)水平異常？是否具有規(guī)律性的分子遺傳學(xué)特征？是否也具有指導(dǎo)臨床治療和判斷預(yù)后價值的特征性遺傳學(xué)改變？這些問題仍需進(jìn)一步探究。中國人群淋巴母細(xì)胞淋巴瘤患

2、者的相關(guān)蛋白表達(dá)和基因異常情況尚缺乏大宗例數(shù)的研究，尤其是淋巴瘤經(jīng)典的bcl-2、bcl-6和c-myc表達(dá)情況在國內(nèi)未見報(bào)道。因此本研究旨在檢測Bcl-2、Bcl-6和c-Myc蛋白水平及基因異常情況，分析二者可能存在的關(guān)系，以及在淋巴母細(xì)胞淋巴瘤中的臨床意義。
　　 方法：
　　 收集1999年3月至2011年5月間天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院手術(shù)切除的淋巴母細(xì)胞淋巴瘤淋巴結(jié)組織標(biāo)本，并按照嚴(yán)格的納入標(biāo)準(zhǔn)，排除不符合要求

3、的組織，最終有41例淋巴母細(xì)胞淋巴瘤標(biāo)本入選本實(shí)驗(yàn)。將入選標(biāo)本制作組織芯片，并使用免疫組化法檢測41例淋巴結(jié)組織蠟塊的蛋白表達(dá)，包括Bcl-2、Bcl-6、c-Myc、TdT、CD1α、CD34、Ki-67、PAX-5、CD20、CD2、CD3、CD4和CD8。熒光原位雜交法檢測bcl-2(18q21)、bcl-6(3q27)和c-myc(8q24)基因異常情況（包括基因易位、擴(kuò)增和缺失），分析蛋白表達(dá)與染色體異常之間的關(guān)系。對41例淋

4、巴母細(xì)胞淋巴瘤患者進(jìn)行隨訪，計(jì)算生存期并繪制Kaplan-Meier生存曲線，使用log-rank檢驗(yàn)比較患者5年生存率的差異，尋找能夠預(yù)測疾病預(yù)后的指標(biāo)。
　　 結(jié)果：
　　 在Bcl-2、Bcl-6和c-Myc三種蛋白中，c-Myc表達(dá)率最高，其次為Bcl-2和Bcl-6。c-Myc蛋白表達(dá)水平在5％-92％不等，中位數(shù)為42％，蛋白陽性32例(78.0％)。Bcl-2蛋白表達(dá)水平在3％-93％不等，中位數(shù)為38％，

5、蛋白陽性21例(51.2％)。Bcl-6蛋白表達(dá)水平在2％-42％不等，中位數(shù)為8％，蛋白陽性3例(7.3％)。
　　 41例淋巴母細(xì)胞淋巴瘤淋巴結(jié)組織中，31例(75.6％)標(biāo)本bcl-2、bcl-6和c-myc基因正常，10例(24.4％)標(biāo)本的bcl-2、bcl-6或c-myc基因異常。bcl-2基因易位僅發(fā)生于2例淋巴母細(xì)胞淋巴瘤患者中，并且這2例標(biāo)本均為bcl-6和c-myc基因擴(kuò)增的18q21染色體易位。10例(24

6、.4％)淋巴母細(xì)胞淋巴瘤組織標(biāo)本中出現(xiàn)了至少1種染色體異常，其中以涉及c-myc基因異常為首。本研究中，熒光原位雜交分析未發(fā)現(xiàn)bcl-6(3q27)或c-myc(8q24)染色體易位。然而我們檢測到bcl-2、bcl-6和c-myc的基因擴(kuò)增和基因缺失。其中，3例(7.3％)標(biāo)本為bcl-2基因擴(kuò)增;2例(4.9％)為bcl-6擴(kuò)增，6例(14.6％)為c-myc擴(kuò)增;2例(4.9％)為bcl-2基因缺失，1例(2.4％)為bcl-6缺

7、失，2例(4.9％)為c-myc缺失。本研究發(fā)現(xiàn)，淋巴母細(xì)胞淋巴瘤組織中出現(xiàn)了bcl-2、bcl-6和c-myc基因異常以及蛋白水平高表達(dá)，并且部分蛋白高表達(dá)的病例同時存在染色體異常，但是Bcl-2、Bcl-6和c-Myc的蛋白表達(dá)與基因異常之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性(p＞0.05)。
　　 將上述蛋白表達(dá)與基因異常的結(jié)果與41例淋巴母細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床資料進(jìn)行綜合分析，進(jìn)一步探討其對患者預(yù)后的影響。單變量分析和log-rank檢驗(yàn)顯

8、示，臨床Ⅰ-Ⅱ期比Ⅲ-Ⅳ期患者生存期顯著升高(p=0.022);LDH＜2×ULN患者比LDH≧2×ULN患者生存期顯著升高(p=0.037);Bcl-2蛋白陰性患者比陽性患者生存期顯著升高(p=0.003)。分析結(jié)果表明臨床分期Ⅲ-Ⅳ、LDH≧2×ULN和Bcl-2蛋白陽性均預(yù)示了患者預(yù)后較差，生存期縮短。其他候選因子則不能預(yù)測疾病預(yù)后，如年齡、性別、中樞神經(jīng)系統(tǒng)侵犯、骨髓侵犯、Bcl-6蛋白、c-Myc蛋白、bcl-2基因、bcl-

9、6基因和c-myc基因。根據(jù)患者預(yù)后危險因子（臨床分期Ⅲ-Ⅳ、LDH≥2ULN和Bcl-2蛋白陽性）的數(shù)量，41例淋巴母細(xì)胞淋巴瘤患者被分為三組，即低危組、中危組和高危組，含有危險因子較多的組別其生存期相對較短，即高危組患者生存期短語中危組，低危組患者生存期最長(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 淋巴母細(xì)胞淋巴瘤組織中可以檢測到Bcl-2、Bcl-6和c-Myc蛋白的陽性表達(dá)以及相應(yīng)染色體異常，但是蛋白表達(dá)與基因異常