TGF-β1及RAS相關(guān)基因多態(tài)性與腰椎間盤突出癥中醫(yī)證型的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的： 研究TGF-β1及RAS相關(guān)基因ACE及AT1R基因多態(tài)性與腰椎間盤突出癥中醫(yī)證型的關(guān)聯(lián)性，尋找椎間盤退變、腰椎間盤突出癥主要中醫(yī)證型的易感基因，探討基因輔助辨證的可行性，為今后進一步研究中醫(yī)藥基因診療本病提供參考． 方法： 1.根據(jù)胡有谷主編的《腰椎間盤突出癥》以及陸裕樸等主編的《實用骨科學(xué)》中腰椎間盤突出癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合病例選擇標(biāo)準(zhǔn)、病例納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，隨機選擇臨床確診為腰椎間盤突出癥的患者118例

2、作為病例組，其中漢族63例、壯族55例，同時根據(jù)國家中醫(yī)藥管理局1994年批準(zhǔn)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)“腰椎間盤突出癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)、癥候分類、療效標(biāo)準(zhǔn)”及中華人民共和國衛(wèi)生部2002年制定的“中藥新藥治療腰椎間盤突出癥的臨床研究指導(dǎo)原則”對118例腰椎間盤突出癥進行分型，其中符合血瘀證38例、寒濕證29例、肝腎虧虛證31例、濕熱證20例。健康對照組119例，漢族64例、壯族55例，均來源于醫(yī)院健康體檢中心，并根據(jù)既定選擇、納入及排除標(biāo)準(zhǔn)進行篩選，選取與

3、病例組年齡、性別等相匹配的健康人群。 2.以面訪方式收集研究對象的年齡、性別、民族屬性、腰椎負荷強度(職業(yè))以及家族史，計算并記錄樣本個體的體重指數(shù)、吸煙指數(shù)，并根據(jù)MRI影像表現(xiàn)評估椎間盤的退變程度等相關(guān)指標(biāo)。 3.抽取研究對象靜脈血2ml作為檢測樣本，檢測指標(biāo)包括TGF—β1基因-509C/T及-800G/A多態(tài)性、ACE基因I/D及AT1R基因A1166C多態(tài)性，均運用聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)合限制片段長度多態(tài)酶切技術(shù)進行基

4、因多態(tài)性檢測并對其進行基因分型，主要實驗步驟包括外周血白細胞DNA的提取、聚合酶鏈反應(yīng)擴增、限制性內(nèi)切酶消化、凝膠電泳，檢測擴增結(jié)果及讀取各個體基因型等。 4.采用頻率計數(shù)法計算各位點的基因型與等位基因頻率，組間基因型與等位基因頻率比較均采用卡方檢驗或四格表確切概率法，兩組均數(shù)比較采用t檢驗，比值比(oddratio，OR)、交互作用采用Logistic回歸分析計算，相關(guān)性應(yīng)用秩相關(guān)分析．所有數(shù)據(jù)均運用SPSS 13.0 For

5、 Windows統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析． 結(jié)果： 1.TGF-β1基因-509位點及-800位點、ACE基因、AT1R基因1166位點DNA片段PCR擴增均獲得成功，其中TGF-β1基因-509位點PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)SauI酶消化，電泳后根據(jù)消化片段大小檢出純合子CC、雜合子CT及純合子TT三種基因型；TGF-β1基因-800位點PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)Tsp45I酶消化，根據(jù)消化片段大小檢出GG純合子一種基因型；依據(jù)PCR反應(yīng)產(chǎn)

6、物片段，經(jīng)電泳證實，ACE基因檢測到Ⅱ插入純合型、DD缺失型及ID插入雜合子3種基因型。AT1R基因1166位點PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)DdeI酶消化，根據(jù)電泳條帶大小檢出從純合子及AC雜合子兩種基因型。 2.病例組TGF-β1基因-800位點的基因型與健康對照組相同，病例組TGF-β1基因-509C／T多態(tài)性及AT1R基因A1166C多態(tài)性的分布不同于健康對照組，但組間比較無明顯差異(P>0.05)，病例組ACE基因I／D多態(tài)性分布與

7、對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，TGF-β1基因-509C／T多態(tài)性、ACE基因I／D多態(tài)性及AT1R基因A1166C多態(tài)性與椎間盤的退變程度相關(guān)(P<0.05)，AT1R基因A1166C多態(tài)性分布在病例組內(nèi)漢族及壯族比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 3.TGF-β1基因-509多態(tài)性、ACE基因I/D多態(tài)性、AT1R基因A1166C多態(tài)性與重度腰椎負荷強度的累積暴露和腰椎間盤突出癥發(fā)生的風(fēng)險增加相關(guān)(P<0.01

8、)。 4.腰椎間盤突出癥血瘀證組TGF-β1基因-509位點CT基因型頻率高于非血瘀證組(P<0.05)；腰椎間盤突出癥寒濕證TGF-β1-509位點基因型及C/T等位基因頻率分布與肝腎虧虛證比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，寒濕證漢族與壯族比較TGF-β1-509位點基因型及C/T等位基因分布頻率差異也有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；腰椎問盤突出癥肝腎虧虛組Ⅱ型ACE基因頻率高于非肝腎虧虛證組(P<0.05)，肝腎虧虛組內(nèi)壯

9、族攜帶ACE基因Ⅰ等位基因頻率高于漢族；在病例組中，壯族AT1R基因A1166C位點AA基因型頻率明顯高于漢族(P<0.05)，寒濕證腰椎間盤突出癥AC基因型頻率高于血瘀證組(P<0.05)。 5.同時攜帶TGF-β1基因-509位點CT基因型和ID型ACE基因以及重度腰椎負荷強度者患腰椎間盤突出癥血瘀證風(fēng)險較高(P<0.01)；同時攜帶AT1R基因1166位點AC基因型和TGF-β1基因-509位點CC基因型可使個體患寒濕證腰

10、椎問盤突出癥的風(fēng)險增加(P<0.05)；個體攜帶Ⅱ型ACE基因可增加肝腎虧虛證腰椎間盤突出癥的患病風(fēng)險(P<0.01)． 結(jié)論： 1、TGF-β1基因-509C/T及AT1R基因A1166C多態(tài)性均非腰椎間盤突出癥獨立危險因素，ACE基因I/D多態(tài)性是腰椎間盤突出癥的危險因素之一，腰椎疾患家族史、體質(zhì)指數(shù)及腰椎負荷強度(職業(yè))是腰椎間盤突出癥的主要危險因素； 2、TGF-β1基因-509C/T、ACE基因I/D及

11、AT1R基因A1166C多態(tài)性與腰椎間盤的退變程度相關(guān)，攜帶TGF-β1基因-509位點CT基因型、DD型ACE基因及AT1R基因1166位點AC基因型存在椎間盤退變程度加重的風(fēng)險，即TGF-β1基因與RAS相關(guān)基因參與了腰椎間盤的退變進程，ACE基因I/D多態(tài)性與腰椎間盤突出癥的發(fā)生有一定關(guān)系； 3、TGF-β1基因-509位點CT基因型是腰椎間盤突出癥血瘀證的易感基因，重度腰椎負荷強也是腰椎間盤突出癥血瘀證發(fā)生的危險因素之一

12、； 4、Ⅱ型ACE基因是腰椎間盤突出癥肝腎虧虛證發(fā)生的易感基因； 5、同時攜帶AT1R基因1166位點AC基因型和TGF-β1基因-509位點CC基因型的個體可增加腰椎間盤突出癥寒濕證發(fā)生的風(fēng)險； 6、腰椎間盤突出癥血瘀證以TGF-β1基因-509位點CT基因型為主，攜帶TGF-β1基因-509位點CT基因型椎間盤退變也較嚴(yán)重，兩者間有否關(guān)聯(lián)有待研究； 7、ACE基因I/D多態(tài)性是廣西漢族及壯族人群腰椎間