新生大鼠顱骨縫體外牽張?jiān)缙贜O和NOS的作用初探.pdf

1、第一部分新生大鼠顱骨縫體外牽張模型的建立 目的:建立新生SD大鼠顱頂骨骨縫器官培養(yǎng)模型，探討建立顱骨縫體外牽張模型的意義和可行性。 方法:取一周齡SD大鼠顱頂骨正中矢狀縫組織塊(骨縫位于組織塊中央)，大小8×10mm2，進(jìn)行器官培養(yǎng)。培養(yǎng)基選用無酚紅高糖型DMEM(DulbeccosModifiedEagleMedium；GRH，56436，USA)，其中添加10﹪胎牛血清(FBS，GibcoBRL)，青霉素(100U/

2、L)，鏈霉素(100U/L)。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的顱頂骨均安裝螺旋彈簧，彈簧選用直徑為0.01英寸的不銹鋼絲(Elgiloy0.01in，semiresilent；RockyMountain，Denver，CO，USAREFE00273)彎制(包括水平支持部分和垂直置入部分)。實(shí)驗(yàn)組施加0.2克(0.00196N)張力，對(duì)照組將彈簧固定不施力，兩組分別于0、1、6、24、48h收獲標(biāo)本。對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)HE染色，做組織形態(tài)學(xué)觀察

3、。 結(jié)論外源性張力有擴(kuò)寬骨縫的作用，骨縫器官可在體外培養(yǎng)中成功存活并繼續(xù)生長(zhǎng)、發(fā)育。 第二部分機(jī)械張力對(duì)新生大鼠顱骨縫組織生成一氧化氮的調(diào)節(jié)作用 目的:檢測(cè)機(jī)械張力作用下，新生SD大鼠顱頂骨骨縫組織生成一氧化氮(nitricoxide，NO)在早期不同時(shí)段的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化；探討NO在張應(yīng)力調(diào)節(jié)骨縫生長(zhǎng)早期的作用。 方法:分別取1h、6h、24h、48h實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組器官培養(yǎng)的培養(yǎng)液，用NO試劑盒(南京聚力生物

4、醫(yī)學(xué)工程研究所提供)，根據(jù)硝酸還原酶法，通過分光光度計(jì)測(cè)出樣品管和標(biāo)準(zhǔn)管的消光值，根據(jù)其比例用公式：NO(μmol/l)=(樣品管消光值/標(biāo)準(zhǔn)管消光值)×100μmol/l計(jì)算出每個(gè)樣品管中的NO含量。 :結(jié)論體外培養(yǎng)的新生大鼠顱骨縫在牽張力作用下，NO表達(dá)顯著增加。 第三部分機(jī)械張力作用下新生大鼠顱骨縫組織中一氧化氮合酶三種同形異構(gòu)體的表達(dá) 目的:觀察體外培養(yǎng)的新生SD大鼠顱頂骨骨縫在牽張力作用下，一氧化氮合酶(N

5、itricOxideSynthase，NOS)三種同形異構(gòu)體(eNOS，nNOS，iNOS)的表達(dá)及其分布；探討一氧化氮(nitricoxide，NO)在機(jī)械應(yīng)力調(diào)節(jié)骨縫組織改建過程中所起的作用。 方法:取一周齡SD大鼠顱頂骨正中矢狀縫組織塊(骨縫位于組織塊中央)，大小8×10mm2，進(jìn)行器官培養(yǎng)，培養(yǎng)基選用無酚紅高糖型DMEM(DulbeccosModifiedEagleMedium：GRH，56436，USA)，其中添加10

6、﹪胎牛血清(FBS，GibcoBRL)，青霉素(100U/L)，鏈霉素(100U/L)。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的顱頂骨均安裝螺旋彈簧，彈簧選用直徑為0.01英寸的不銹鋼絲(Elgiloy0.01in，semiresilent；RockyMountain，Denver，CO，USAREFE00273)彎制(包括水平支持部分和垂直置入部分)。實(shí)驗(yàn)組施加0.2g(0.00196N)張力，對(duì)照組將彈簧固定不施力，兩組分別于0、1、6、24、48h收獲標(biāo)