殼聚糖基引導(dǎo)組織再生膜對(duì)大鼠顱骨缺損的修復(fù)作用.pdf

1、目的:骨組織工程發(fā)展迅速，其結(jié)合材料學(xué)和生物學(xué)技術(shù)，通過(guò)構(gòu)建人工支架或引導(dǎo)組織再生膜來(lái)輔助完成自體骨的再生，具有材料來(lái)源廣泛，感染、排斥等并發(fā)癥少的優(yōu)點(diǎn)，有望在將來(lái)取代傳統(tǒng)的骨修復(fù)方法。目前，臨床上所用的引導(dǎo)組織再生膜分為再生膜和不可再生膜，不可再生膜因需要二次手術(shù)且易感染給患者帶來(lái)不便，可再生膜存在降解速度不能調(diào)控，且機(jī)械強(qiáng)度不足而不能起到支撐作用的問(wèn)題。羧甲基殼聚糖在水溶液中以兩性電解質(zhì)的形式存在，可以形成不同的空間構(gòu)象，從而賦予其

2、很多特殊的生物學(xué)活性，是一種適用于GTR膜片的潛在生物材料。但是，由于羧甲基殼聚糖膜易溶于水，且降解速度快，所以本研究欲尋找一種合適的交聯(lián)方法構(gòu)建一種符合要求的GTR膜材料，并驗(yàn)證其有效性。
　　方法:通過(guò)全骨髓法純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)試羧甲基殼聚糖、磺酸化殼聚糖、硫酸軟骨素和N-乙酰氨基葡萄糖對(duì)BMSCs增殖的促進(jìn)作用，篩選出最優(yōu)材料構(gòu)建GTR膜;通過(guò)MTT法確定納米羥基磷灰石(Nano-HA)的添

3、加比例后，采用CaCl2和雙縮水甘油醚雙交聯(lián)，通過(guò)相轉(zhuǎn)化法制備了一種不對(duì)稱膜，并測(cè)定了膜片的吸水性、溶脹性、孔隙率、拉伸強(qiáng)度、斷裂伸長(zhǎng)率和細(xì)胞相容性;通過(guò)將膜片植入大鼠背部皮下和腿部肌肉來(lái)驗(yàn)證膜片的體內(nèi)降解特性和組織相容性;構(gòu)建大鼠極限顱骨缺損模型，將膜片敷在缺損處驗(yàn)證其對(duì)骨缺損的修復(fù)作用，于第4周、8周、12周處死大鼠，取缺損處組織，脫鈣、固定后行HE染色和Masson染色。
　　結(jié)果:利用全骨髓法可以純化出BMSCs，MTT實(shí)

4、驗(yàn)證實(shí)羧甲基殼聚糖和硫酸軟骨素對(duì)BMSCs具有促進(jìn)作用;通過(guò)MTT法確定Nano-HA的最佳添加比例為10％;通過(guò)CaCl2和1，4-丁二醇雙縮水甘油醚雙交聯(lián)相轉(zhuǎn)化法構(gòu)建的不對(duì)稱膜片吸水率為360.69％，溶脹比為174.41％，拉伸強(qiáng)度為0.640MPa，斷裂伸長(zhǎng)率為54.424％，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示材料的細(xì)胞毒性為1級(jí)，細(xì)胞相容性實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞可在膜片上貼附、伸展、增殖;體內(nèi)植入實(shí)驗(yàn)顯示，膜片在體內(nèi)至少可完整保持8周，在第1周和第2周有

5、輕微的炎癥反應(yīng)，第4周炎癥反應(yīng)消失，表明具有良好的生物降解性能和組織相容性;大鼠極限顱骨缺損實(shí)驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)組在第4周有一定的新骨生成，第8周新骨貫穿缺損區(qū)域，但相對(duì)較薄，第12周缺損基本修復(fù)完成，對(duì)照組缺損區(qū)域被纖維結(jié)締組織侵入，第12周時(shí)僅有少量新骨生成。
　　結(jié)論:羧甲基殼聚糖和硫酸軟骨素有促進(jìn)BMSCs增殖的作用，加入Nano-HA，通過(guò)雙交聯(lián)利用相轉(zhuǎn)化法所構(gòu)建的不對(duì)稱膜片具有良好的細(xì)胞相容性、組織相容性和生物降解性，且通過(guò)