珊瑚轉(zhuǎn)化型羥基磷灰石(天博)與純相β-磷酸三鈣(Cerasorb)對(duì)成骨細(xì)胞增殖活性的影響.pdf

1、目的:
　　 通過培養(yǎng)St2細(xì)胞,擴(kuò)增,經(jīng)礦化誘導(dǎo),向成骨細(xì)胞(Obs)分化,并對(duì)礦化誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行成骨細(xì)胞鑒定,然后將成骨細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng);將成骨細(xì)胞與珊瑚轉(zhuǎn)化型羥磷灰石(天博骨粉,CHA)、純相β-磷酸三鈣(Corasorb,β-TCP)進(jìn)行體外復(fù)合培養(yǎng),觀察研究CHA、β-TCP對(duì)成骨細(xì)胞增殖活性的影響。從細(xì)胞水平評(píng)價(jià)CHA、β-TCP兩種生物支架材料的生物相容性及對(duì)成骨細(xì)胞增殖能力,進(jìn)而為組織工程人工骨支架材料的選擇應(yīng)用提

2、供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.St2細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代:
　　 用培養(yǎng)St2細(xì)胞株,獲得穩(wěn)定良好的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞,應(yīng)用完全DMEM低糖培養(yǎng)基對(duì)St2細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增培養(yǎng),并進(jìn)行凍存作為庫存細(xì)胞。
　　 2.St2細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化、鑒定和培養(yǎng):
　　 將生長(zhǎng)良好的St2細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液內(nèi)常規(guī)培養(yǎng),使St2細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,然后對(duì)誘導(dǎo)后的細(xì)胞采用Gomori鈣鈷法,堿性磷酸酶(ALP)染色

3、,茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色,進(jìn)行成骨細(xì)胞的鑒定獲得成骨細(xì)胞,進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。
　　 3.分組將成骨細(xì)胞接種在CHA、β-TCP支架材料上進(jìn)行培養(yǎng)。
　　 采用體外復(fù)合細(xì)胞培養(yǎng),觀察成骨細(xì)胞分別在CHA和β-TCP上的增殖情況,用直接計(jì)數(shù)法檢測(cè)第3、5、7d成骨細(xì)胞與CHA、β-TCP接種復(fù)合培養(yǎng)的細(xì)胞增殖率;再用MTT法分析復(fù)合培養(yǎng)第3、5、7d時(shí),CHA、β-TCP對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響;用PNPP法檢測(cè)第3、5、7d時(shí),CHA

4、、β-TCP對(duì)成骨細(xì)胞ALP活性的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.誘導(dǎo)St2細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化,進(jìn)行成骨細(xì)胞的鑒定:Gomori鈣鈷法,ALP染色后細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)胞漿內(nèi)呈現(xiàn)灰黑色顆粒;茜素紅礦化結(jié)節(jié)染色后礦化結(jié)節(jié)呈現(xiàn)深紅色,結(jié)節(jié)周圍細(xì)胞胞漿也呈紅染。
　　 2.直接計(jì)數(shù)法檢測(cè)成骨細(xì)胞與CHA、β-TCP接種復(fù)合培養(yǎng)的細(xì)胞增殖情況:
　　 2.1 CHA、β-TCP表面的成骨細(xì)胞隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞數(shù)

5、量逐漸增加,CHA、β-TCP均具有較好的細(xì)胞相容性。
　　 2.2成骨細(xì)胞在CHA表面的增殖速度較β-TCP快。
　　 3.MTT法檢測(cè)β-TCP、CHA對(duì)成骨細(xì)胞增殖及活力顯示:成骨細(xì)胞在CHA表面的增殖活性高于β-TCP。
　　 4.PNPP法檢測(cè)各組ALP活性結(jié)果顯示:Obs+CHA組ALP活性表達(dá)高于Obs+β-TCP組(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.成骨細(xì)胞在CHA上增殖速