肥厚型心肌病基因與表型關(guān)系研究.pdf

1、第一部分修飾基因與肥厚型心肌病患者表型關(guān)系的研究研究背景肥厚型心肌病(HCM)為常染色體顯性遺傳的單基因病，以左心室和(或)右心室肥厚為特征，常為不對(duì)稱肥厚并累及室間隔。通過(guò)長(zhǎng)期對(duì)HCM臨床表型與基因型的研究發(fā)現(xiàn)，攜帶不同基因突變的患者的臨床表型不同；攜帶帶有相同基因突變患者的臨床表現(xiàn)和預(yù)后也有很大的差異；即使在攜帶相同突變的同一家系成員之間，發(fā)病年齡和臨床表現(xiàn)也有很大的不同。因此，目前認(rèn)為HCM的臨床表型是致病基因、環(huán)境因素、修飾基因

2、共同作用的結(jié)果。 在本研究中采用候選基因策略，我們從心肌肥厚病的致病基因中選擇候選基因，參考公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的SNP數(shù)據(jù)，通過(guò)基于人群的關(guān)聯(lián)研究，尋找HCM的修飾基因。我們根據(jù)該原則選擇了三個(gè)的候選基因：心臟型肌球蛋白結(jié)合蛋白C(cMYBPC)基因、NELIN基因、α-半乳糖苷酶(α-GAL)基因。 研究目的利用基于人群的關(guān)聯(lián)分析研究，探討cMYBPC基因、NELIN基因、α-GAL基因是否是肥厚型心肌病的修飾基因。

3、 對(duì)象和方法研究對(duì)象為根據(jù)世界衛(wèi)生組織制定的心肌病分類標(biāo)準(zhǔn),在中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院就診的226例肥厚型心肌病病人，彼此無(wú)血緣關(guān)系。超聲心動(dòng)圖顯示原因不明的心臟左室壁厚度≥13mm，或心尖部肥厚或右室肥厚，并排除長(zhǎng)期高血壓、缺血性心肌病及其他可引起繼發(fā)性心室肥厚的疾病。對(duì)照組226例，為無(wú)肥厚型心肌病病史的“健康人”。按性別、年齡(不超過(guò)±5歲)與相應(yīng)病例匹配，彼此無(wú)親緣關(guān)系。本研究獲得衛(wèi)生部倫理委員會(huì)的同意。所有參加者簽署了知

4、情同意書。 抽取外周靜脈血，分離白細(xì)胞，從白細(xì)胞中提取基因組DNA。我們分別在肥厚型心肌病患者和對(duì)照中，對(duì)MYBPC3基因、NELIN基因和α-GAL基因的編碼區(qū)及其側(cè)翼序列以末端雙脫氧法用ABI377DNA測(cè)序儀測(cè)序篩查多態(tài)位點(diǎn)。MYBPC3基因發(fā)現(xiàn)三個(gè)多態(tài)位點(diǎn)：12289A/G、14369C/T、18443A/G：NELIN基因發(fā)現(xiàn)一個(gè)多態(tài)位點(diǎn)：8638A/G；α-GAL基因未篩查到多態(tài)位點(diǎn)。利用PCR和限制性酶切片段長(zhǎng)度多

5、態(tài)性(RFLP)的方法對(duì)多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。多元Logistic回歸模型校正性別、年齡因素后，分析基因多態(tài)對(duì)肥厚型心肌病患者臨床表型的影響。 結(jié)論1.攜帶cMYBPC基因18443GG基因型的HCM患者心肌肥厚的程度重于攜帶AG基因型和AA基因型的HCM患者。 2.cMYBPC基因14369C/T和12289A/G及NELIN8638A/G多態(tài)不影響肥厚型心肌病患者的臨床表型。 第二部分中國(guó)肥厚型心肌病患者中心臟法

6、布萊病患病率研究背景目前科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)在以往診斷為晚發(fā)型肥厚型心肌病的患者中，男性6％為法布萊病患者，女性12％為法布萊病患者。法布萊病存在特效的治療方法，因而明確診斷法布萊病顯得尤為重要。 研究目的調(diào)查在中國(guó)肥厚型心肌病患者中法布萊病的患病率，為臨床工作提供參考。 對(duì)象和方法研究對(duì)象為在中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院門診或住院的診斷明確的肥厚型心肌病病人，共58例，經(jīng)家族調(diào)查無(wú)血緣關(guān)系，經(jīng)基因篩查排除HCM是由四種常見(jiàn)致

7、病基因突變所致(β肌球蛋白重鏈基因、心臟型肌球蛋白結(jié)合蛋白C基因、肌鈣蛋白T基因、肌鈣蛋白I基因)。120例性別、年齡匹配的健康人作為正常研究對(duì)照。抽取外周靜脈血，分離白細(xì)胞，從白細(xì)胞中提取基因組DNA，利用PCR擴(kuò)增α-半乳糖苷酶A基因編碼區(qū)及其側(cè)翼序列，PCR產(chǎn)物以末端雙脫氧法用ABI377DNA測(cè)序儀測(cè)序。 結(jié)果與結(jié)論中國(guó)肥厚型心肌病患者中心臟法布萊病患病率為2％。中國(guó)約有20萬(wàn)心臟法布萊病患者，酶替代療法是他們的特效療法