蓇密牌鈣片與馬鹿角對成骨細胞增殖分化及其對OPG---小鼠的體內(nèi)作用的研究.pdf

1、目的：觀察蓇密牌鈣片及馬鹿角對鼠胚成骨細胞MC3T3-E1的增殖分化作用及細胞內(nèi)OPG、RANKLmRNA的表達；觀察蓇密牌鈣片及馬鹿角對OPG-/-小鼠的骨密度及骨代謝生化指標的作用。方法：采用MEM（10%FBS）培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞，細胞計數(shù)法描繪成骨細胞生長曲線；MTT法檢測蓇密牌鈣片（0、50、100、500、1000μg/ml）、馬鹿角（0、5、50、500μg/ml）和鈣爾奇D陽性對照組對鼠胚成骨細胞MC3T3-E1增殖的作用；

2、蓇密牌鈣片（0、50、100、500、1000μg/ml）、馬鹿角（0、5、50、500μg/ml）和鈣爾奇D陽性對照組干預鼠胚成骨細胞MC3T3-E1 72h后，比色法檢測細胞內(nèi)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)的含量，酶聯(lián)免疫法檢測抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartrate-resistant acid phosphatase form 5b，TRACP5b)的含量，RT-PCR法檢測骨保護蛋白(osteo

3、protegerin,OPG)、核因子КB激活受體配體(receptor activator of NK –КB ligand,RANKL)mRNA的表達。以O(shè)PG基因敲除純合子(homozygous OPG knockout ,OPG-/- )小鼠為研究對象，蓇密牌鈣片、馬鹿角及鈣爾奇D分別給各組OPG-/-小鼠連續(xù)灌胃30天，酶聯(lián)免疫法測定血清中TRACP5b的含量，競爭放射免疫法測定血清中骨鈣素（Bone–γcarboxyglu

4、tamic acid, BGP）的含量；雙能x線骨密度儀（Dual Engergy X-ray Absorbtiometry，DEXA）測定股骨和總體的骨密度（Bone mineral density，BMD）。結(jié)果：蓇密牌鈣片及馬鹿角作用于MC3T3-E1成骨細胞72h后，可促進其增殖，OD值增加（P＜0.05），降低TRACP5b的含量、增加ALP的含量，促進OPGmRNA表達，同時抑制RANKLmRNA表達。蓇密牌鈣片及馬鹿角能增