Ion Torrent測序技術檢測Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤病患者NF1基因突變.pdf

1、目的:應用Ion Torrent個體化基因組測序儀(PGM)檢測Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤病(NF1)患者NF1基因，探討Ion Torrent測序技術檢測NF1患者外周血DNA中NF1基因突變的可行性，評價相同位點Ion Torrent測序與Sanger測序結(jié)果的吻合性，了解Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤患者NF1基因突變的類型。
　　方法:收集2012年11月至2013年11月送檢至廣州金域醫(yī)學檢驗中心分子遺傳室的14例臨床確診的Ⅰ型神經(jīng)纖維瘤病(NF1

2、)患者EDTA-Na2抗凝靜脈血。提取基因組DNA，首先兩管多重PCR擴增患者NF1基因全部外顯子，多重PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后用Ion Torrent個體化基因測序儀(PGM)對患者NF1基因進行測序，檢測到致病突變后，設計普通PCR引物并擴增相應外顯子，用Sanger測序法對患者NF1基因相應的突變位點進行驗證，Ion Torrent PGM覆蓋不全的外顯子需普通PCR擴增并用Sanger測序法重新檢測。
　　結(jié)果:在14例Ⅰ型神經(jīng)

3、纖維瘤病患者中，檢測到11例患者NF1基因致病突變，各突變均位于不同外顯子，無明顯突變熱點，其中2例無義突變，5例小插入或缺失突變，2例錯義突變，2例剪接突變，1例患者突變位于5號外顯子覆蓋缺失區(qū)域，3例患者未檢測到致病突變。所有患者NF1基因Ion Torrent PGM覆蓋率均在97％以上，平均測序深度均在1500～2100×之間。Ion Torrent PGM檢測到的致病突變經(jīng)Sanger測序法驗證結(jié)果一致。
　　結(jié)論:1、