二倍體馬鈴薯原生質體培養(yǎng)與體細胞融合技術研究.pdf

1、本試驗對一批從CIP引進馬鈴薯材料進行倍性鑒定，研究倍性鑒定過程中材料與預處理對染色的影響；以篩選出的二倍體馬鈴薯葉肉細胞為原生質體游離材料，研究二倍體馬鈴薯原生質體培養(yǎng)的基本條件和影響因素以及體細胞融合參數(shù)對融合頻率的影響等。研究結果表明：
　?。?）在進行馬鈴薯倍性鑒定時，取材是關鍵，由塊莖發(fā)根所得的根尖其分裂細胞明顯多于試管苗的根尖，且染色體清晰可見染色效果好；預處理以0.1％秋水仙堿處理5～8h效果最佳；染色劑中卡寶品紅較

2、醋酸洋紅的著色深，分色明顯；在鑒定的60份材料中，二倍體材料10份，三倍體材料7份，四倍體材料43份。
　?。?）原生質體游離時針對不同材料所需的滲透壓不同，實驗所用的三種基因型的滲透壓分別是Ⅲ-5為0.35～0.40M， JK3是0.35M，Ⅱ-10為0.30～0.45M；不同的酶液組合對原生質體的產量有很大的影響，當纖維素酶為0.8%，果膠酶為0.4%時，原生質體產量最高，酶解最充分；實驗采用愈傷組織和葉肉細胞分別進行游離，兩

3、者的活性不存在差異，但產量葉肉細胞明顯高于愈傷組織；預處理能夠提高原生質體的產量和活性；不同基因型的馬鈴薯葉肉細胞分離得到的原生質體在產量、活性及細胞大小上都存在差異；不同激素組合對愈傷組織分化也存在很大的影響。
　?。?）化學誘導融合時，當采用的融合劑為PEG6000，所用濃度為30%時，誘導的融合率最高；電融合中成串電壓和時間是決定原生質體成串、膜接觸的關鍵參數(shù)，當排列電壓為100v/cm，作用時間為30s時，成串率達到最大值

4、；當直流脈沖電壓為1000v/cm，作用時間為100μs，脈沖次數(shù)為1次時，雙核融合率最高；化學融合和電融合在融合頻率上的差異不大，均在35%以上，但在愈傷形成時間及分化時間上，由電融合得到的細胞都較 PEG融合早，且愈傷的分化頻率大于PEG融合；不同基因型組合的融合細胞培養(yǎng)存在很大的差異，由Ⅲ-5+JK3組合融合培養(yǎng)得到的細胞分裂快，愈傷組織形成早，分化快，并得到了植株；而Ⅲ-5＋Ⅱ-10組合細胞分裂相對遲一些，但由化學融合培養(yǎng)的細胞