人二倍體細(xì)胞及Vero細(xì)胞培養(yǎng)流感病毒的實驗研究.pdf

1、流行性感冒是一種古老的傳染病，是由流感病毒引起急性呼吸道傳染病。流感病毒屬正粘病毒科，分甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，可引起大流行、局部流行和散發(fā)。流感病毒抗原易變異，傳播迅速，流行廣泛，人群的特異性免疫狀況不穩(wěn)定，發(fā)病率高，老年人及患有各種慢性病或體弱者容易出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，病死率高。流感一般臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、肌痛、乏力、鼻塞、咽痛和咳嗽，流感還能加重潛在疾病或者引起繼發(fā)細(xì)菌性肺炎或原發(fā)流感病毒性肺炎。當(dāng)流感發(fā)生大流行時，可引起

2、人群住院率、死亡率上升。世界衛(wèi)生組織認(rèn)為，減少流感危害的主要措施是疫苗接種。傳統(tǒng)的流感疫苗是利用雞胚進(jìn)行生產(chǎn)的。而雞胚這種傳統(tǒng)的培養(yǎng)方式存在許多不足，不能夠滿足大批量生產(chǎn)疫苗的需要。細(xì)胞基質(zhì)培養(yǎng)病毒應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)有很多優(yōu)越性，因此只有尋找新的流感病毒培養(yǎng)基質(zhì)才能滿足流感疫苗生產(chǎn)技術(shù)發(fā)展的需要。同時流感也是國際上第一個實現(xiàn)全球監(jiān)測的傳染病，所以尋找新的細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)也是有效地分離和鑒定流感病毒的基礎(chǔ)，有利于流感病毒的監(jiān)測和臨床快速診斷。

3、 第一部分人二倍體細(xì)胞培養(yǎng)流感病毒的實驗研究本實驗對流感病毒在幾種人二倍體細(xì)胞上培養(yǎng)的可行性進(jìn)行了初步研究。將四株不同型別的流感病毒(A/Kunming/1/2005 Va H3N2、A/Wisconsin/67/2005H3N2、A/New Caledonia/20/1999 H1N1和B/Malaysia/2506/2004)分別接種于KMB<,17>細(xì)胞、2BS細(xì)胞和MRC-5細(xì)胞上，在無血清的條件下于不同pH值和不同胰酶濃度

4、的維持液中35℃培養(yǎng)72小時后收獲病毒，測定血凝效價。實驗中所用四株病毒在KMB17細(xì)胞上培養(yǎng)，H3N2亞型毒株(A/Kunming/1/2005 va和A/Wisconsin/67/2005)血凝效價明顯高于另外的H1N1亞型(A/NewCaledonia/20/1999)和B型(B/Malaysia/2506/2004)毒株。在2BS細(xì)胞上培養(yǎng)，H3N2亞型毒株(A/Wisconsin/67/2005)檢測不到血凝效價，而對H1N1

5、亞型(A/New Caledonia/20/1999)和B型(B/Malaysia/2506/2004)毒株則有一定的敏感性。MRC-5細(xì)胞對本兩株H3N2亞型的毒株(A/Kunming/1/2005 Va和A/Wisconsin/67/2005)敏感度低。該細(xì)胞對另外兩株其它型別的流感病毒A/NewCaledonia/20/1999 H1N1和B/Malaysia/2506/2004有一定的敏感度。綜上所述，認(rèn)為上述三種人二倍體細(xì)胞不

6、是分離培養(yǎng)流感病毒的最佳細(xì)胞基質(zhì)。若想作為常規(guī)的流感病毒分離培養(yǎng)用細(xì)胞，仍需大量的適應(yīng)性研究和條件摸索。第二部分流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株的傳代穩(wěn)定性研究本實驗將流感病毒Vero適應(yīng)株A/Kunming/1/2005 Va H3N2第25代病毒在已進(jìn)行優(yōu)化的培養(yǎng)條件下在Vero細(xì)胞上進(jìn)行連續(xù)傳代，監(jiān)測其各代次血凝效價的變化，以驗證其在Vero細(xì)胞中的傳代穩(wěn)定性。并對連續(xù)傳代后病毒進(jìn)行了PCR檢測以及透射電鏡檢測，以驗證適應(yīng)株的基因及病毒