聯(lián)苯雙酯對環(huán)孢素A藥代動力學的影響及其機制的遺傳藥理學研究.pdf

1、遺傳藥理學研究發(fā)現(xiàn)，藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運體是決定藥物體內(nèi)過程的關(guān)鍵因素，其活性的改變是導致藥物相互作用的主要機制。藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運體的遺傳多態(tài)性是導致藥物相互作用個體差異的重要決定因素。 環(huán)孢素A屬于鈣調(diào)磷酸酶抑制劑家族，主要通過特異性抑制淋巴細胞反應和增生發(fā)揮抑制免疫排斥的功效。目前臨床上，環(huán)孢素A廣泛的應用于器官移植術(shù)后免疫排斥反應的預防與治療，該藥物在療效發(fā)揮的同時，表現(xiàn)出明顯的藥物代謝動力學個體差異以及狹窄的治療窗，由于藥物

2、相互作用導致的毒副反應也十分常見。目前的研究證實，環(huán)孢素A在人體內(nèi)的代謝、轉(zhuǎn)運以及與之相關(guān)的藥物相互作用的發(fā)生均與CYP3A4以及P糖蛋白的活性密切相關(guān)。針對環(huán)孢素A在人體內(nèi)的藥代學以及藥效學個體差異所開展的研究也多圍繞上述兩個功能蛋白開展。 細胞色素P450（CYP450）酶系由基因超家族編碼的酶蛋白組成，參與各種內(nèi)源性以及外源性物質(zhì)的生物轉(zhuǎn)化。其中，CYP3A4是P450家族中的重要成員，主要表達在肝臟與小腸，參與了臨床50

3、％以上藥物的代謝，是環(huán)孢素A在人體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化過程中最重要的功能蛋白。目前的研究認為，藥物對CYP3A4活性的影響，是導致環(huán)孢素A相關(guān)藥物相互作用的主要原因之一。CYP3A4作為機體重要功能蛋白的一種，其活性在基礎(chǔ)狀態(tài)下也存在顯著的個體差異。CYP3A4*18B是由日本學者發(fā)現(xiàn)的具有功能意義的突變位點，最近的研究發(fā)現(xiàn)，該位點的突變與環(huán)孢素A在機體內(nèi)的藥代動力學的個體差異密切相關(guān)。其中，基因型為CYP3A4*18突變型純合子的受試者體內(nèi)環(huán)孢

4、素A的代謝顯著加強。 P-糖蛋白是由多藥耐藥基因MDR1編碼的一種能量依賴型藥物外排泵，在肝臟、小腸、腎臟等人體的多種組織中都有分布。對于各種藥物在人體的吸收、分布與消除均發(fā)揮重要作用。P-糖蛋白活性的高低與環(huán)孢素A在機體代謝的個體差異有著直接的聯(lián)系。 核受體中的孕烷X受體（pregnaneXreceptor，PXR）核組成性雄烷受體（constitutiveandrostanereceptor，CAR）對多種CYP45

5、0代謝酶以及轉(zhuǎn)運體的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)發(fā)揮重要作用。目前，利用表達PXR或CAR的CYP450酶以及MDR1熒光素酶報告基因平臺，發(fā)現(xiàn)通過激動PXR或CAR來發(fā)揮對下游靶基因產(chǎn)生誘導效應的化學成分已經(jīng)成為新藥研發(fā)以及臨床藥學研究的重要手段之一。 聯(lián)苯雙酯（bifendate），是合成五味子素的中間體，是我國研制的降酶藥物，常用于肝病的治療。臨床研究發(fā)現(xiàn)該藥物可以通過穩(wěn)定肝細胞膜，加強肝細胞損傷的修復，改善肝組織的病理損害。同時聯(lián)苯雙酯作為

6、一種重要的輔助藥物，常與環(huán)孢素A聯(lián)合使用，目的是降低環(huán)孢素A長期服用帶來的肝毒性。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，聯(lián)苯雙酯與環(huán)孢素A的合用，確實能夠降低長期服用環(huán)孢素A伴隨的肝臟損害，患者體內(nèi)的環(huán)孢素A的血藥濃度也出現(xiàn)明顯的下降。 基于以上研究背景，本課題旨在查明聯(lián)苯雙酯對CYP3A4以及藥物轉(zhuǎn)運體P-糖蛋白在人體產(chǎn)生的影響以及這種影響對聯(lián)苯雙酯與環(huán)孢素A在機體的藥物相互作用機制探討的參考價值。通過雙熒光素報告基因在轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平探討聯(lián)苯雙酯對CY

7、P3A4以及P-糖蛋白的影響；通過嚴格設計的臨床實驗，探討在不同CYP3A4*18B基因型的健康受試者體內(nèi)，聯(lián)苯雙酯對環(huán)孢素A藥代動力學的影響；以他林洛爾、咪噠唑侖為探藥，在整體藥代動力學水平和藥物相互作用層面探討聯(lián)苯雙酯對CYP3A4以及P-糖蛋白活性的影響，為臨床上聯(lián)苯雙酯與環(huán)孢素A藥物相互作用提供分子水平解釋，并為臨床聯(lián)苯雙酯與環(huán)孢素A的合理應用以及基因?qū)騻€體化治療提供指導。從整體水平，為初步探討聯(lián)苯雙酯與環(huán)孢素A藥物相互作用的

8、機制提供線索。 本課題的主要研究結(jié)果如下： 1.在共轉(zhuǎn)染PXR表達質(zhì)粒和相應啟動子的雙熒光報告基因檢測中，聯(lián)苯雙酯顯著增加CYP3A4和MDR1的啟動子活性；在共轉(zhuǎn)染CAR表達質(zhì)粒和相應啟動子的雙熒光報告基因檢測中，聯(lián)苯雙酯對CYP3A4和MDR1的啟動子活性沒有顯著影響。 2.在不同CYP3A4*18B基因型個體中，研究聯(lián)苯雙酯對環(huán)孢素A藥代動力學參數(shù)的影響。發(fā)現(xiàn)聯(lián)苯雙酯能夠顯著降低環(huán)孢素A血藥濃度，并且環(huán)孢素

9、A體內(nèi)藥代參數(shù)的變化程度在CYP3A4*18B基因型間有顯著差異。 3.用他林洛爾作為探藥，研究了聯(lián)苯雙酯對人體P-糖蛋白轉(zhuǎn)運體活性的影響，發(fā)現(xiàn)聯(lián)苯雙酯降低了他林洛爾的血藥濃度，提示聯(lián)苯雙酯在人體內(nèi)顯著的誘導了P-糖蛋白的轉(zhuǎn)運活性。 4.用咪噠唑侖作為探藥，研究了不同CYP3A4*18B基因型個體中聯(lián)苯雙酯對CYP3A4活性的影響，發(fā)現(xiàn)咪噠唑侖以及1-羥咪噠唑侖血藥濃度在應用聯(lián)苯雙酯后顯著降低，并且咪噠唑侖與1-羥咪噠唑

10、侖的AUC（0-24），AUC（0-∞），和Cmax的變化程度在CYP3A4*18B不同基因型間有顯著差異，在CYP3A4*18B突變型純合子型中降低程度最顯著。 5.對PXR1207C>T突變在中國漢族人群中的分布頻率進行篩查，在80個DNA樣本中未發(fā)現(xiàn)突變的發(fā)生。 總之，本項目從基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控，臨床整體水平為聯(lián)苯雙酯與環(huán)孢素A的臨床藥物相互作用和反應的個體差異提供了遺傳藥理學的解釋，為臨床合理使用聯(lián)苯雙酯和環(huán)孢素A、B