PAMAM樹狀化合物作為呼吸道合胞病毒基因疫苗遞送載體的研究.pdf

1、DNA疫苗能刺激機體產生細胞免疫與體液免疫,其制造成本低廉,易于儲存及運輸。但是,裸DNA疫苗在體內傳輸過程中,很容易被酶水解,不能引起足夠的免疫原性,很難達到好的免疫保護效果。DNA遞送載體能夠保護DNA分子不被酶水解。本課題選取聚酰胺-胺(PAMAM)樹狀化合物作為基因疫苗遞送載體,通過細胞毒性實驗及細胞凋亡實驗研究了PAMAM G4及PAMAM G5在多種細胞系中的毒性,在此基礎上初步探索了該樹狀化合物作為人呼吸道合胞病毒(Hum

2、anrespiratory syncytial virus,RSV)基因疫苗載體的在動物模型上應用。
　　 選取多個不同的電荷(N/P)比,制備PAMAM/DNA復合物,瓊脂糖凝膠電泳結果表明,PAMAM G4及PAMAM G5都能夠與DNA形成復合物。酶切保護實驗結果表明,形成復合物后,DNA不被核酸酶降解,即PAMAM能夠有效保護所攜帶的DNA分子不被降解。為進一步探索PAMAM的細胞毒性,分別選取了HEK293細胞、Hep

3、G2細胞、U251細胞及A549細胞進行毒性實驗。結果表明,對于同種細胞系PAMAM G5的細胞毒性高于PAMAM G4的細胞毒性。PAMAMG448 h的半抑制率在0.1μg/μL,而PAMAM G548 h的半抑制率在0.05μg/μL。對于同一種PAMAM載體,隨著濃度的增加毒性增大,細胞毒性呈現(xiàn)劑量依賴性。細胞凋亡實驗結果表明,PAMAM在加入24 h后能夠導致一些細胞壞死或晚期凋亡,早期凋亡現(xiàn)象不明顯,同時,細胞壞死或晚期凋亡