浙南地區(qū)兒童呼吸道合胞病毒基因分型、遺傳變異特征及亞型與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　1.檢測(cè)浙南地區(qū)2009年1月至2011年12月2個(gè)連續(xù)流行季節(jié)中呼吸道合胞病毒(RSV)亞型及優(yōu)勢(shì)基因型，研究亞型和基因型與臨床疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。
　　2.闡明本地區(qū)RSV亞型及優(yōu)勢(shì)基因型的流行病學(xué)特征;針對(duì)浙南地區(qū)流行的RSV病毒株進(jìn)行G蛋白遺傳變異研究，探究RSV G蛋白基因的進(jìn)化和變異特征。
　　方法：
　　1.研究對(duì)象:為2009年1月～2011年12月（包含2個(gè)連續(xù)RSV流行季節(jié)）浙南

2、地區(qū)2家三甲醫(yī)院（育英兒童醫(yī)院、臺(tái)州醫(yī)院）因RSV下呼吸道感染住院的5歲以下患兒，按照隨機(jī)抽樣的方法每年隨機(jī)抽取200例，共計(jì)600例。痰液標(biāo)本采用直接免疫熒光法篩查RSV抗原，陽性結(jié)果待下一步實(shí)驗(yàn)。
　　2.RNA提取以及cDNA合成:根據(jù)文獻(xiàn)分別合成巢氏PCR的擴(kuò)增G基因及A、B亞型各自特異序列的引物，第一步PCR擴(kuò)增G基因片段長(zhǎng)度約1000bp，覆蓋G基因全序列;第二步PCR結(jié)果鑒定A、B亞型，A亞型RSV片段長(zhǎng)度為250b

3、p，B亞型片段長(zhǎng)度為341bp。
　　3.G蛋白基因同源性分析:調(diào)出GenBank中A、B亞型基因型代表株，與各陽性標(biāo)本擴(kuò)增的G基因進(jìn)行序列比對(duì)和分析。
　　4.收集RSV感染患兒的流行病學(xué)及臨床資料，包括年齡、性別、發(fā)病季節(jié)、病程、住院天數(shù)、臨床癥狀及體征、吸氧、住ICU及機(jī)械通氣等，比較不同RSV亞型及基因型感染患兒臨床疾病的嚴(yán)重程度。
　　結(jié)果：
　　1.600份RSV陽性標(biāo)本共檢出A亞型株274株(45.

4、7％)，B亞型株321株(53.5％)，混合5株(0.8％)。兩個(gè)連續(xù)流行季節(jié)的優(yōu)勢(shì)基因型為BA型及NA1，亞型的流行變化趨勢(shì)為B亞型轉(zhuǎn)變到A亞型。每年的12月-次年2月為RSV感染爆發(fā)季節(jié)。RSV亞型與疾病嚴(yán)重程度無明顯相關(guān)性(x2=0.4678，P=0.5774)，基因型NA1較基因型BA感染后病情嚴(yán)重（P值＜0.05）。
　　2.18株A亞型G基因與標(biāo)準(zhǔn)株A2比較，核苷酸同源性為90.3％～92.5％，氨基酸的同源性為85.

5、6％～92.6％;18株A亞型各株之間核苷酸及氨基酸同源性分別為96.9％～99.8、％81.5％～99.8％;16株B亞型G基因與標(biāo)準(zhǔn)株CH18537比較，核苷酸同源性為87.8％～93.5％，氨基酸的同源性為83.3％～99.5％;16株B亞型各株之間核苷酸及氨基酸同源性分別為90.3％～99.3％、84.8％～99.6％。
　　3.18株A亞型氨基酸長(zhǎng)度分為297aa、312aa，B亞型氨基酸長(zhǎng)度為295aa、315aa、3

6、10aa。12株BA亞型分離株在C末端均出現(xiàn)60重復(fù)核苷酸的插入，推導(dǎo)出的氨基酸序列在263位后出現(xiàn)20個(gè)氨基酸殘基的插入;分離WENZHOUB39在C末端核苷酸第693位出現(xiàn)9個(gè)連續(xù)核苷酸插入(ACACAAAAA)，推導(dǎo)出G蛋白氨基酸序列C末端231位后TQK（蘇氨酸-谷氨酰胺-賴氨酸）的插入;WENZHOUB01株在核苷酸序列C末端813位出現(xiàn)6個(gè)連續(xù)核苷酸(CCCGGA)的缺失，推導(dǎo)出G蛋白氨基酸序列C末端271位后PG（脯氨酸-