重慶地區(qū)呼吸道合胞病毒F和G基因變異分析(2009年-2011年).pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行了論述。
　　第一部分重慶地區(qū)呼吸道合胞病毒F和G基因變異分析(2009年-2011年)。
　　目的：在前期研究結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析重慶地區(qū)2009-2011年度重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院急性呼吸道感染(ARTIs)住院患兒呼吸道合胞病毒的亞型流行情況，并進(jìn)一步檢測呼吸道合胞病毒G基因的遺傳變異度及F蛋白在276位點的基因突變特點。
　　方法：2009年4月至2011年3月每周一、三、五定期收集

2、重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院呼吸科急性呼吸道感染患兒的鼻咽深部吸取物標(biāo)本，采用RT-PCR方法擴(kuò)增鼻咽深部吸取物標(biāo)本中的RSV G蛋白和F蛋白基因并直接測序。
　　結(jié)果;從2009年4月到2011年3月共檢測921份標(biāo)本，其中hRSV感染的陽性標(biāo)本有210份(22.8％)，A、B兩亞型的陽性率分別為35.7％(75/210)和63.8％(134/210)，A、B兩亞型共同感染的陽性率為0.5％(1/210)。通過對25例hRSV感染的

3、陽性標(biāo)本G蛋白基因的進(jìn)化樹分析，發(fā)現(xiàn)9例A亞型陽性標(biāo)本全部屬于GA2，16例B亞型陽性標(biāo)本分別屬于GB2和BA株。與發(fā)達(dá)國家相比，本研究中hRSV感染在年齡分布，臨床表現(xiàn)和季節(jié)分布方面沒有明顯的差別。50％的hRSV感染患兒年齡在6個月以下，24.3％的hRSV感染患兒年齡在6-12個月。在隨機(jī)抽取的45份hRSV感染陽性標(biāo)本中，30份為A亞型陽性標(biāo)本，15份為B亞型陽性標(biāo)本。通過RT-PCR的方法共檢測到17份A亞型陽性標(biāo)本在F基因2

4、76位點發(fā)生了突變，陽性率為56.7％(17/30)。hRSV B亞型標(biāo)本F基因276位點未發(fā)現(xiàn)基因突變。
　　結(jié)論；2009-2011年hRSV仍是重慶地區(qū)兒童急性呼吸道感染的主要病原。與2009年4月-2010年11月以B亞型優(yōu)勢流行不同，在2010年11月-2011年3月A亞型毒株流行占優(yōu)勢;與2008-2009年以近年新發(fā)現(xiàn)的BA株流行占優(yōu)勢相比，2009-2011年BA株的流行趨勢有所下降。
　　第二部分20例X-

5、連鎖無丙種球蛋白血癥的臨床特征和分子特點分析。
　　目的：X-連鎖無丙種球蛋白血癥(XLA)是Btk基因突變引起的一類常見的原發(fā)性免疫缺陷性病。XLA患者以外周血成熟B細(xì)胞顯著下降以及血清中所有免疫球蛋白濃度極度低下為特征。本研究旨在分析和探討20例X-連鎖無丙種球蛋白血癥患兒的臨床特征和分子特點。
　　方法:2010年3月-2011年7月共20例患兒被確診為X-連鎖無丙種球蛋白血癥。本研究采用RT-PCR方法直接擴(kuò)增Btk

6、基因的cDNA，PCR產(chǎn)物直接雙向測序并對測序結(jié)果進(jìn)行分析。突變位點通過對Btk基因的DNA外顯子的相應(yīng)部位進(jìn)行擴(kuò)增、測序證實，并對確診患兒母親的Btk基因的DNA進(jìn)行該位點的基因分析。
　　結(jié)果：20例XLA患兒的平均起病年齡為1.5歲，平均診斷年齡為7.7歲。在20例XLA患兒的臨床表現(xiàn)中，呼吸道感染是最常見的臨床表現(xiàn)(n=18，90.0％)，其他依次為中耳炎(n=15，75％)、關(guān)節(jié)炎(n=9，45％)、皮膚感染(n=3，1

7、5％)、敗血癥(n=2，10％)和皮疹(n=1，5％)。Btk基因分析在20例患兒中發(fā)現(xiàn)了18種不同基因突變，其中包括7種新發(fā)突變(c.134T＞A,c.1646T＞A,c.1829C＞G,c.711G＞T,c.1235G＞A,c.523+1G＞A,c.1024-1025insTTGCTAAAGCAACTGCTAAAGCAAG)。11種突變?yōu)橐褕蟮劳蛔?，包?種錯義突變(c.994C＞T，c.1987C＞A，c.1885G＞T,c.50

8、2T＞C,c.1085C＞T,c.1816C＞T,c.214C＞T,c.1912G＞A)和3種無義突變(c.1267T＞A，c.1793C＞G，c.1618C＞T)。18例Btk基因突變中有8例位于酪氨酸激酶區(qū)(TK)，4例位于Src同源區(qū)2(SH2)，4例位于位于血小板-白細(xì)胞C激酶底物同源區(qū)(PH)，2例位于酪氨酸激酶同源區(qū)(TH)。
　　結(jié)論：通過對20例X-連鎖無丙種球蛋白血癥患兒臨床和分子特點分析，發(fā)現(xiàn)BTK基因的7個新