氧化應激狀態(tài)下人小梁網(wǎng)細胞中miRNA199b-5p對TGF-β2作用機制的研究.pdf

1、分類號：R77密級：學位類別：科學學位口專業(yè)學位團。學校代碼：10062學號：2011602612學科門類：醫(yī)學又肄眚斜鼻母碩士學位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：氧化應激狀態(tài)下人小梁網(wǎng)細胞中miRNAl99b5p對TGF—p2作用機制的研究TITLE：TheMechanismofmiRNAl99b一5pRegulatingTGFp2inHumanTrabecularMeshworkCellsUnderOxidat

2、iveStress一級學科：臨床醫(yī)學二級學科：眼科學論文作者：封霄指導教師：汪建濤教授導師組成員：蘇暢研究員天津醫(yī)科大學研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要目的：青光眼的眼壓增高與小梁網(wǎng)的氧化變性、流出阻力增加有關(guān)。原發(fā)性開角型青光眼(PrimaryOpenAngleGlaucoma，POAG)患者中細胞外基質(zhì)(ExtracellularMatrix，ECM)的異常沉積可導致小梁網(wǎng)流出阻力增加。本實驗主要研究在氧化應激

3、狀態(tài)下人眼小梁網(wǎng)細胞(HumanTrabecularMeshworkCells，HTMC)中細胞外基質(zhì)的表達，以及miRNA199b5p對轉(zhuǎn)化生長因子p2(TransformingGrowthFactort32，TGFB2)的作用。方法：在人眼小梁網(wǎng)細胞中，不同濃度過氧化氫(H202)刺激HTMC后，利用MTT實驗檢測細胞生長活性的變化。300uMH202刺激HTMC15h，real—timePCR和免疫組化分別檢測細胞中TGFB2和纖

4、維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)等細胞外基質(zhì)基因和蛋白的表達?；蛐酒瑱z測在氧化應激狀態(tài)下miRNA199b5p的表達，并用realtimePCR驗證miRNA199b5p的表達。參考生物信息學miRNA199b5p靶定TGF62。miRNA199b5p過表達檢測其對HTMC功能的影響并檢測miRNA199b5p對TGFB2的作用。結(jié)果：在人眼小梁網(wǎng)細胞中，H202可抑制細胞生長活性，H202可以促進TGF132和細胞外基質(zhì)F

5、N的表達：H202刺激HTMC后，TGFB2表達在1h、2h、4h、8h、12h、24h較對照組增加，相對表達量分別為104_033，504125，854248，1088225，1183215，1872309，2538518，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(PO01)；FN表達在1h、2h、4h、8h、12h、24h較對照組增加，相對表達量分另0為100O17，2。82030，4。56035，522186，665218，1106757，1710

6、412，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P001)?；蛐酒蛂ealtimePCR檢測顯示在氧化應激狀態(tài)下miRNA199b5p表達下調(diào)，H202刺激HTMC后，miRNAl99b5p于1h、2h、4h、8h、12h、24h表達較對照組下調(diào)，相對表達量分另0為1OOO16。050017，O57039，041014，045009，038012，017004，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P001)。在HTMC中過表達miRNA199b5p可抑制細胞的