促紅細(xì)胞生成素改善大鼠心肺復(fù)蘇后心功能不全機(jī)制的研究.pdf

1、背景和目的：
　　 心功能不全是導(dǎo)致心跳驟?；颊邚?fù)蘇后死亡的重要原因之一。我們前期研究觀察到促紅細(xì)胞生成素（EPO）對(duì)大鼠心肺復(fù)蘇后的心功能不全有改善作用，但對(duì)EPO改善心肺復(fù)蘇后心功能不全的途徑和機(jī)制尚不明確。為此本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察EPO干預(yù)對(duì)心肺復(fù)蘇后心肌細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞骨架蛋白的變化，探討EPO改善心肺復(fù)蘇后心功能不全的機(jī)制；通過(guò)體外心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型，觀察EPO和蛋白激酶C（PKC）抑制劑白屈菜紅堿干預(yù)后，體外心肌細(xì)

2、胞凋亡及黃素蛋白自體熒光強(qiáng)度的變化,探討EPO抗心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制，為臨床預(yù)防和治療復(fù)蘇后心功能不全提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 第一部分：
　　 取前期心肺復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)已制作的大鼠心肌石蠟組織塊，分為正常組、CPR組和EPO組，每組8只。行Tunel染色觀察各組心肌細(xì)胞凋亡率，SABC免疫組化法觀察微管蛋白、結(jié)蛋白和肌動(dòng)蛋白變化。
　　 第二部分：
　　 將SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞建立缺氧/復(fù)氧模

3、型（H/R），并隨機(jī)分為4組：①正常組；②缺氧/復(fù)氧組（缺氧10h，復(fù)氧4h）；③ EPO治療組（缺氧/復(fù)氧同時(shí)，加EPO干預(yù)）；④抑制劑組（缺氧/復(fù)氧同時(shí)，加EPO和PKC抑制劑聯(lián)合干預(yù)）。 流式細(xì)胞儀Annexin V FITC/PI法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率，免疫熒光法觀察各組細(xì)胞微管蛋白、肌動(dòng)蛋白結(jié)構(gòu)和熒光強(qiáng)度變化，共聚焦顯微鏡觀察各組細(xì)胞黃素蛋白自體熒光變化，監(jiān)測(cè)線粒體ATP敏感性鉀通道（mitoKATP）開(kāi)放情況。
　　

4、 結(jié)果：
　　 第一部分：
　　 1.CPR組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)（314.1個(gè)±30.7個(gè)）較正常組（165.2個(gè)±45.9個(gè)）明顯升高（P＜0.05）。EPO治療組心肌細(xì)胞凋亡數(shù)為（242.1個(gè)±20.0個(gè)），與CPR組比較，凋亡細(xì)胞數(shù)明顯減少，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 2.正常組、CPR組、EPO治療組大鼠肌動(dòng)蛋白免疫組化平均光密度值分別（8.18±1.04、8.51±1.96、6.34±

5、0.43）×10-2，組間兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；微管蛋白免疫組化平均光密度值分別（8.87±1.85、7.35±0.26、9.70±0.13）×10-2，組間兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；結(jié)蛋白免疫組化平均光密度值分別為（7.57±2.96、8.20±3.17、7.48±1.82）×10-2，組間兩兩比較均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 第二部分：
　　 1.缺氧/復(fù)氧組心肌細(xì)

6、胞凋亡率較正常組明顯增加{（42.5％±8.0％）對(duì)（13.9％±2.0％）}，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。EPO處理降低了缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞凋亡率（22.7％±5.0％），與缺氧/復(fù)氧組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。蛋白激酶C抑制劑阻斷了EPO抗缺氧/復(fù)氧損傷后心肌細(xì)胞凋亡作用，其凋亡率（46.7％±17.0％）與EPO治療組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 2.缺氧/復(fù)氧組心肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白、微管蛋

7、白熒光染色結(jié)構(gòu)明顯破壞，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)模糊不清，平均熒光強(qiáng)度值{（0.43±0.15）×10-2、（0.36±0.10）×10-2}較正常組{（5.0±1.6）×10-2、（8.2±3.6）×10-2}明顯減弱，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但與EPO治療組{（1.8±0.20）×10-2、（1.7±0.36）×10-2}比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 3.EPO治療組心肌細(xì)胞黃素蛋白自體熒光強(qiáng)度（2.20±0

8、.11）×10-2較正常組、缺氧/復(fù)氧組、抑制劑組{（0.15±0.05）×10-2、（0.28±0.17）×10-2、（0.99±0.33）×10-2}均明顯增強(qiáng)，分別比較差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.減少心肌細(xì)胞凋亡是EPO改善窒息誘導(dǎo)大鼠心肺復(fù)蘇后心功能不全的重要機(jī)制之一。
　　 2.EPO抗凋亡機(jī)制可能是通過(guò)磷酸化PKC,繼而開(kāi)放mitoKATP通道而起作用。