OMgp不同結(jié)構(gòu)域在神經(jīng)突起生長抑制中的作用研究.pdf

1、為了對OMgp結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系有進(jìn)一步的了解,我們克隆了小鼠OMgpcDNA,按照其結(jié)構(gòu)特征分段表達(dá)了含有不同結(jié)構(gòu)域的OMgp蛋白.通過與表達(dá)有NgR的CHO細(xì)胞的結(jié)合實(shí)驗(yàn)、GST沉降實(shí)驗(yàn)和對原代培養(yǎng)的海馬錐體細(xì)胞的抑制試驗(yàn)證明,OMgp LRR在其神經(jīng)突起生長抑制功能中起重要作用,單獨(dú)的LRR結(jié)構(gòu)域具有與全長OMgp蛋白幾乎相同的神經(jīng)突起生長抑制功能,而刪除了此結(jié)構(gòu)域的蛋白則失去了對神經(jīng)突起的抑制作用.含有部分LRR結(jié)構(gòu)域的蛋白也有較

2、強(qiáng)的作用,這提示,OMgp在完成其神經(jīng)突起抑制功能時(shí),可能并不是每個(gè)亮氨酸重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域都是必須的.為了進(jìn)一步鑒定OMgp與NgR作用的最小單位,該研究使用基因突變法分別刪除了OMgp LRR的不同亮氨酸富含重復(fù)序列,表達(dá)蛋白后對其功能進(jìn)行研究.結(jié)果表明,刪除了LRR25-56、57-133、134-180的蛋白片段沒有明顯的功能改變,而刪除了第181-228位氨基酸的LRR蛋白雖然仍具有結(jié)合NgR的功能,但卻失去了對神經(jīng)突起的生長抑制

3、功能.這提示,在OMgp與NgR結(jié)合時(shí),可能存在多個(gè)結(jié)合位點(diǎn),而LRR181-228則可能是OMgp最重要的功能結(jié)構(gòu)域.刪除了LRR181-228的OMgp片斷失去了對神經(jīng)突起的生長抑制功能,但仍具有結(jié)合NgR的功能,有可能作為神經(jīng)生長抑制因子的競爭劑用于促進(jìn)CNS損傷后神經(jīng)的再生.由于目前還未得到OMgp的晶體結(jié)構(gòu),該研究使用同源模建的方法模擬了OMgp的三維結(jié)構(gòu)并進(jìn)行了初步分析,為進(jìn)一步對神經(jīng)突起生長抑制因子與配體相互作用及神經(jīng)再生